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됩니다. 그러나 293T의 유전자를 타겟팅 할 뿐입니다. Lenti를 쓰는것은 293T로부터 바이러스를 얻어서 다른 세포에 높은 효율로 transduction 함이 목적인데 이것은 안되겠지요.
293T 교정이 목적인가요? Lenti vector를 쓸 이유가 없어보이는데...
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lenti
(비회원)
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18.11.21 14:14
1.
lentiviral system을 이용해 얻어낸 lentivrial particle를 다른 세포에 뿌렸을 때
그 세포에서 genome integration되는 부분은 lentiviral vector의 5LTR 3LTR 사이 뿐입니다.
질문자님 말씀대로하면 HEK293T를 교정하는 것은 가능하나
이건 lentiviral system이 아닌 그냥 plasmid transfection입니다.
윗 분 말씀대로 plasmid transfection 효율이 매우좋은 HEK293T를 교정하는게
목적이라면 굳이 lentiCRISPRv2를 쓰는 이유가 궁금하네요
유전자 교정 후에도 Stable하게 Cas9과 sgRNA를 발현하는 cell line이 되버려서 기대하지 않은 효과가 일어날 수 도 있습니다.
lentiCRISPRv2는 통상적인 수법의 plasmid transfection의 효율이 매우 좋지 않은 세포들을 교정하기 위한 어쩔 수 없는 수단입니다.
2.
transfection reagent vs electroporation
CRISPR system이 K.O / K.I mice를 만드는 데 자주 사용되기 때문에
ES cell에서 자주 쓰는 elcetroporation를 많이 씁니다.
fibroblast같은 배양세포라면 transfection reagent를 써도 상관 없습니다.
fibroblast같은 경우 오히려 electroporation이 잘 안될수도 있습니다.(최신 기기들은 잘 된다고 합니다만..)