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Q. protocol상 쿠마시블루 staining 전에 증류수로 겔을 씻어내려 그때 효소도 같이 씻어내리기
때문에 mmp는 염색이 안되고 결국 white band로 뜨는것이 맞나요?
: 아뇨.. 증류수로 gel을 washing 해도 단백질이 빠져나가지 않습니다.
gel에서 단백질을 뽑아 내려면 전기를 거는 방법외에 확산으로는 거의 뻐져 나오지 않습니다.
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레벨1
류카넵지
(대학원생)
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18.11.08 15:02
그러면 쿠마시블루에의해서 mmp가 염색이 되는 부분이 있음에도 불구하고
white band가 뜨는 이유에 대해서는 어떻게 해석해야할까요?
실제 동일 양을 전기영동해서 염색한 gel과 zymography gel을 볼 수 있으면 좋겠네요..
MMP 단백질을 많이 loading하면 zymography gel을 염색한 후에도 band가 보입니다.
질문하신 분은 MMP 단백질양을 어느정도 loading하나요?
MMP를 gel에서 활성을 보는 시간이 보통 48시간을 보기 때문에 SDS-PAGE에 안보일 정도
loading 해도 활성이 잘 나옵니다.
대학교 다닐 때 실험 하면서 질문자와 동일한 의문이 들어 실험을 한번 해봤습니다.
SDS-PAGE를 해서 염색하지 않고 48시간 후에 염색을 해봤습니다.
단백질이 빠져 나가지 않나 의문이 들었는데 단백질이 잘 염색되어 나왔습니다.