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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 pcr에 관한 조언이 필요 합니다.
알JulyK(대학생)  |  2018.10.29 16:28
이제 갓 대학원생을 시작하는 석사 1학기차 학생입니다.
학부때는 미생물 관련 실험만 하다가 처음으로 PCR실험을 시작하게 되었는데, 세포에서 부터 RNA prep 후 cDNA 합성까지 전부 protocol 대로 진행 한 후 GAPDH로 정량을 확인하였습니다. 
문제는 처음에 1:5 dilution했을때는 정량이 확인 되었는데 밴드가 너무 진하게 나와서 dilution비율을 높여서 진행해보니 (임의로 sample명들을 1,2,3,4라고 하겠습니다.)4번 밴드가 연하게 나오고 다시 희석해서 진행해보니 3번이 연하게 나오고 마지막에는 아예 1번이 가장 진하고 3번이 두번째로 진하고 2번과 4번의 밴드가 비슷하게 나왔습니다. 문제는 pipetting error 인거 같은데 cDNA dilution 때 문제인건지 dilution 후 cDNA 분주 때의문제인건지 원인을 알 수 없어 답답합니다. 혹시 경험이나 조언이 있으면 부탁드립니다.
#PCR
 
#cDNA
 
#dilution
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
희석을 어떤식으로 하나요?

실제 실험한 자세한 순서(희석 등)라든지 내용을 알수가 없지만 pipetting error 일겁니다.

희석 및 분주 할 때는 한번에 tip 하나씩 새로운 걸 사용해서 해보세요.


대왕개구리SPEED  |  2018.10.29   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
탭핑과 파이펫팅 에러가 맞는 것 같은데
미생물 실험을 했으면 랩에 실링용 파라필름이 있을텐데
그 위에 끈적임이 있는 로딩 버퍼를 1ul씩 떨어뜨리는 연습을 해 보세요
그러면 파이펫팅 에러를 줄이는 연습을 할 수 있습니다.
개구리Q.E.D.  |  2018.10.29   
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