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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
조회 1989  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 pcr실험..
알니니니(일반인)  |  2018.10.26 10:38
연구실에서 pcr 실험을 하는 대학원생입니다
저랑 후배가 실험을 하면 저는 결과가 잘 나오는데
후배는 떠야 할 밴드가 뜨지않네요..
프라이머와 dna는 동일한 튜브에 들은것을 사용하고 그밖에 들어가는 시약들도 같은 회사 같은제품으로 여러개를 주문해서 각자 나눠서 쓰거든요(결국 모든 시약이 같음)
근데 제가 하면 떠야할 밴드가 잘 나오는데 후배가 하면 떠야할게 안떠요. 근데 후배 한명만 그런게 아니라 두명 이상이 같은 증상을 보이니 이게 무슨 문제인건지.. 기계도 동일한 것을 사용하는데..
#pcr
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
이 문제를 해결하는 방법은 질문 하신 분이 사용한 모든 pcr 재료를 후배들에게 주고

후배들이 PCR mixture를 만드는 동안 코앞에 붙어서 단계별로 하나씩 지시하고 확인한후

다음 단계로 넘어갑니다.

마지막 PCR machine에 tube를 넣을 때까지 붙어서 확인하면 어느 단계에 문제가 있는지 꼭

발견할 수 있습니다.
대왕개구리SPEED  |  2018.10.26   
시약들도 같은 회사 같은제품으로 여러개를 주문해서 각자 나눠서 쓰거든요(결국 모든 시약이 같음) 

같은 시약을 따로 보관하면 실험초보자들의 것은 "같은" 시약이지만 종종 "다른" 시약이 되기도 합니다.
가령 buffer를 예를 들면, 냉동했던 buffer를 님은 다 녹여서 사용하겠지만 초보자들은 덜 녹여서 사용하기도 합니다. 결국 buffer의 농도가 달라진다는 말이지요.
님의 시약을을 완전하게 준비해서 그걸 같이 사용해 보세요. 아마 같은 결과가 나올겁니다.
대왕개구리강시  |  2018.10.26   
저도 제 프로토콜을 후배들에게 주고 
후배들을 옆에서 붙어서 가르쳤음에도 불구하고
나중에 후배들이 하는 걸 보면 틀리게 하고 있더라구요 ^ ^
알려주는 당시에는 이해하고 있는 것 처럼 보여도 
혼자서 하게되면 원리를 간과하는 경우가 많아서 어떤 부분을 스킵하거나
대수롭지 않게 생각해서 저런 결과들이 나옵니다.

두 가지 방법이 있는데,
먼저 후배들이 가지고 있는 시약으로 질문자님이 한 번 실험을 진행 해 보세요.
그래서 결과가 나오면 강시님 답변과 같은 상황이므로 시약관리를 주의시키면되고
그게 아니라면 

시약은 질문자분께서 준비하고 붙어서 다시 하는걸 관찰해 보세요.
분명 어딘가 빼먹는 과정이 있습니다.
그리고 나서 후배들에게 pcr 원리를 한번 물어보세요
그리고 그걸 실험을 할 때 어느 부분에 대입되는지 한 번 물어보면 
후배들이 어떤 부분을 간과하는지 짐작 할 수 있고, 다시 알려줄 수 있습니다.
개구리Q.E.D.  |  2018.10.29   
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