실험한 전기영동 사진이 안보이네요?
질문 중에 사진이 없어도 가능한 것만 답변을 드립니다.
1. 같은 colony를 이용한 것인데 오른쪽에서 2번째와 4번째는 왜 저렇게 나온것인지
알고싶습니다.ㅠㅠ
= 사진이 있어야 합니다.
2. 사이즈 마커가 3줄 밖에 안보이는데 전기영동을 덜해서 저렇게 나온것인지 해상도가
낮아서 그런것인지 궁금합니다.ㅠㅠ 가르쳐주세요ㅠㅠㅠ
= 양이 적은건지 전기영동 시간 문제인지 사진이 있어야 합니다.
3. 16s rrna가 pcr과정에서 primer로 사용된것같은데 그게 어떻게 사진에서 보여지는
건지 모르겠습니다.ㅠㅠㅠ colony를 그대로 넣고 한것인데 여기서 16s rrna가 어떤 역할을
하는건지 궁금합니다.ㅜㅜ
= 16S rRNA는 primer로 작용하지 않습니다. primer로 작용했을거란 근거는 무엇을 보고
판단한건가요?
4. size marker는 3ul넣었는데 그 이유가 있나요?
정량을 위해서 marker를 사용하는 것이 아니라면 전기영동에서 적당히 보일 정도면
얼마를 loading하더라도 괜찮습니다. 일부러 많은 양을 사용할 필요는 없으니까요..
2ul를 사용해도 되고 4ul를 사용해도 됩니다.
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18.10.21 16:32
ㅠㅠㅠ 사진을 첨부 다시해드리겠습니다 혹시 파일로 된것도 안보이시나요??ㅠㅠㅠ
16S rRNA는 전기영동이 저렇게 나온것과 관련이 있다고 해서 조사하던중에 프라이머로 사용되는 경우도 있다고 해서 그런줄 알았습니다ㅠㅠ
역시 마커사진은 보이는데 실험 사진은 안보이네요..
실험 결과가 어떻게 나왔는지 알수는 없으나 rRNA가 영향을 준다는 것은.. 아무래도 전기영동
패턴을 봐야 알수 있겠네요..
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18.10.21 16:48
사진이 아예 안보인다는 것인가요 아니면 사진속의 전기영동이 안보인다는 것인가요??ㅠㅠ 주황색으로 나와있습니다ㅠㅠ
다른사진 첨부해보겠습니다ㅠㅠ
파일이 첨부는 된것 처럼 보이나 파일이 없는 것으로 나옵니다.
따라서 전기영동 된 사진 자체를 볼수가 없습니다.
실험한 사진 1장만 첨부해 보세요
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18.10.21 17:09
넵!!! 감사합니다ㅜㅜ 지금 보내겠씁니다ㅠㅠㅠ
먼저 전기영동 시간은 BPB가 gel의 반은 내려갈때 까지 하는게 해석하기 좋습니다.
마커의 경우 거의 안내려 간것 같구요.. 더 내려야 합니다.
마커 양은 양을 4ul~5ul를 loading 해보세요..
마커에서 보이는 3개 band는 2k, 1k, 0.5k band입니다.
그 사이에 있는 band는 전기영동을 더 내려야 보일겁니다.
전기영동 사진을 해석해 보면 다른 well은 증폭이 잘되었는데 A well은 PCR 증폭이
안되었는데도(target band도 비특이적 증폭 band도 안보임) 남아있는 primer가 안보이는
걸로 봐서 반응 mixture를 혼합할 때 primer를 빼먹은것 같습니다.
B well은 약간 증폭이 일어났지만(* 표시 부분) 증폭이 많이 일어나지 않았기 때문에
primer가 많이 남아있는 상태입니다. rRNA가 아닙니다.
primer dimer 자리라고 표시된 곳을 잘 보면 다른 well 도 반응 후 남아있는 primer가 극미량
남아있는 걸 볼수 있습니다.
또다른 질문이 있으면 올려주세요.
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18.10.21 17:36
Awell 이 오른쪽에서 4번째이고 Bwell이 오른쪽에서 2번째 well인건가요??
ㅠㅠ 그리고 이게 colony를 채취해서 pcr한거라는데 16s rRNA와 연관이 있다고 합니다 여기서 그렇다면 나머지 같은 길이로 나온 band들은 이 16s rRNA를 의미 하는걸까요?
이번에 첨부한 사진도 안보이네요ㅠㅠ
혹시 핸드폰에서 하시나요?
A가 오른쪽에서 4번째, B가 오른쪽에서 2번째 well입니다.
Q. 16s rRNA와 연관이 있다고 합니다.그건 지금 정보로는 실험한 사람만 알수 있습니다.
그리고 target product가 무엇인지 모른상태에서 답하기가 어렵네요..
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유니지
(과기인)
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18.10.21 17:52
아ㅠㅜ 아니요 노트북으로 하고 있습니다ㅠㅠ
이번에도 사진이 안보이나요?
이게 pcr을 업체에 맡겨서 한거라 거기까지는 잘 모르겟네요ㅠㅠㅠ 답변해 주셔서 감사합니다!
네. 안보입니다.
업체에 의뢰를 한거라도 target이 있었을 건데요.
첨부한 사진을 메일로 보내 드리겠습니다.
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레벨2
유니지
(과기인)
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18.10.21 18:00
감사합니다ㅠㅠㅠㅠ 혹시 그 타겟이 16s rRNA일순 있을까요?
그건 실험자 외에 아무도 모릅니다..
primer 서열이라도 알면 target이 뭔지 알수 있습니다.
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레벨2
유니지
(과기인)
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18.10.21 18:16
아ㅠㅠ 그렇군요ㅠㅠ 알겠습니다 감사합니다ㅠㅠㅠ 혹시 알게 되면 다시 올려드리겠습니다ㅠㅠ 도움주셔서 감사합니다ㅠㅠㅠ
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Applied_Microbe
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18.10.22 00:13
전압을 100v로 올려서 좀 더 내리시는게 좋겠어요
좀 더 내려야 size marker 분획도 좋아져오ㅡ
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레벨1
Q.E.D.
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18.10.22 00:31
1% gel이고, DNA라면 전기영동을 100V에서 30분 하는게 좋습니다.
지금 위의 답변처럼 밴드가 덜 내려갔구요
업체에 의뢰를 해서 받은거라면 업체에 금액을 지불하신건가요?
그렇다면 전기영동을 다시 해 보고
실험에 대해 이해하지 못하는 부분을 해당 업체에 문의하세요 ^ ^
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레벨2
유니지
(과기인)
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18.10.22 07:05
감사합니다ㅠㅠ 학부실험이라 조교님이 아실듯한데 pcr을 업체에서 했다고만 알려주셔서 잘 모르겠습니다ㅠㅜ 나타난 bend가 16s rrna와 관련이 있다고 하셔서 왠지 그것을 타겟으로 한것같습니다ㅠㅠ
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레벨6
Applied_Microbe
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18.10.22 10:54
16s rRNA 분석용 primer도 여러가지가 있어요.. 그래서 primer들을 어떻게 조합하냐에 따라서 그 PCR product의 사이즈도 다양해집니다. 정확하게 어떤 primer를 사용하셨는지도 확인하시는게 좋습니다.
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레벨2
유니지
(과기인)
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18.10.28 20:40
앗!!! 감사합니다ㅠㅠㅠㅠ