저는 U937 cell을 이용하여 cell lysate 만들어서 western을 하고 있는 대학원생입니다. 제가 develop 하고 나면 U937의 ctrl 군에서 세로로 까맣게 펜으로 그은 듯한 모양이 나타납니다.
예전에도 글을 한번 올린 적 있는데 일단 b-actin 밴드의 확인으로 protein을 ctrl군에 많이 넣었을 가능성은 배제하였고 댓글에서 그 군이 과발현 했을 가능성에 대해 말씀해주시더라구요.
궁금한 것이, 저희 연구실에서는 RIPA lysis buffer와 intron사의 PROPREP을 이용하여 protein lysate를 만들고 있고, 원래는 보통 cell lysate 만들 때에는 RIPA lysis buffer를 많이 이용하고 조직에서 protein을 만들 때에 PROPREP을 이용하고 있습니다.
근데 저는 protein determination하면 조금 낮게 나와서 PROPREP으로 뽑고 있는데, 혹시 PROPREP에 의해서 cell lysate가 과발현할 수 도 있나 궁금합니다.
intron사의 홈페이지에 들어가서 PROPREP에 들어가는 reagent들을 확인했지만, 잘 모르기도 하구요 ㅠㅠ
어떤 성분에 의해서 cell lysate 자체가 과발현할 수도 있는지 아시는 분 있으면 알려주세요!