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질문 IHC 동결조직 절편 만들기 관련 질문입니다.
알꿈꿈이(대학원생)  | 2018.10.17 09:18

IHC에서 4% PFA 고정을 한 후,

scurose 농도 높여가며 serial하게 incubation 할 때요, PBS에 washing 한 후, 이동하나요?

그리고, scurose를  0.1M PBS에 녹여서 하려고하는데요, 

시중 파는 10xPBS 1x로 희석해서 쓰면 되는 건가요?

답변 부탁드립니다. 감사합니다.

#IHC
 
#동결조직절편
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
BU  |  2018.10.18    
Sucrose:

30% sucrose in PBS ==> 15 % sucrose in PBS ==> PBS

농도를 높이지 않고 점점 줄이죠. 바쁘면 삼십퍼센트에만 이틀정도 냉장 보관. 샘플이 밑으로 가라 앉으면 됨. 안 가라 앉으면 가라 앉을 때 까지 기다리면 됨.

텐 엑스 피비에스를 디아이 워터에 1엑스로 희석하면 되요.

"절편"이라는 말 첨들어보내요. "인절미" 떡 인가요? 아니면 브레인 샘플? 무슨 조직이죠?

PBS wash 한번만 해줘요. 중간 중간에 솔루션이 바뀔 때 마다. 갑자기 바꾸지 않고, 한번 씻어주고 다음걸로 넘어가면 됨.
나그네  |  2018.10.18    

30% sucrose 만들어서 (150 g sucrose up to 500 ml with 1X PBS, 상온 저장)

조직을 넣은 후 조직이 바닥으로 가라앉을때까지 기다립니다. 
조직이 가라앉으면 OCT compound로 동결시킨 후 section 하면 됩니다.

개구리Q.E.D.  |  2018.10.18   
동결조직을 위한 시약이기에 
시약은 30% sucrose 또는 15% sucrose 용액을 
1X PBS로 만들고(시중에 파는거 1X로 만들면 됩니다.)
autoclave를 돌린 후 식혀서 냉장보관을 하면 되구요 ^ ^

일반적으로 조직에 30% sucrose를 담고 이틀정도 4도 냉장보관을 하면서
조직에 sucrose가 침투해 가라앉는걸 기다려 주면 됩니다.
위에 방법처럼 농도를 바꿔가면서 1XPBS로 워싱을 해 줘도 되구요
그럼 수고하세요 ^ ^
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