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레벨6
Applied_Microbe
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18.10.14 17:18
RFLP는 restriction enzyme의 작용부위에 염기서열치환, 삽입, 결실등에 의한 염기서열 변화에 따른 절단여부를 확인 하는 방법이니... 절단 패턴을 보고 변이가 있는지를 확인 하는 방향으로 가시는 것이 맞다고 봅니다. 염기서열이 치환될 수도 있으니 무조건 결실이나 삽입으로 보시면 안됩니다.
길이의 구분이 어려운 단편이라는 말이 어떤 의미인지 모르겠네요....
이 방법은 gDNA full sequence를 확인 못하던 시절에 저비용으로 손쉽게 gDNA의 차이를 확인하고자 했던 방법이어서 실험자의 손을 좀 타는 편입니다. 그러니 restriction enzyme의 종류에 따라서 차이가 나타날 수 있습니다. gDNA의 모든 변이를 잡아내질 못합니다.
단적인 예로 RAPD-PCR에서 패턴 차이를 확인했어도 RFLP에서는 나타나지 않기도 합니다.
그리고 실험자가 gDNA를 추출하는 과정에서 실수가 있을 경우 결과가 다르게 나올 수도 있습니다. 그래서 plug를 만들 때와 restriction enzyme을 처리하는 과정에 대한 사전 실험들을 거쳐서 최적화 시켜야 합니다.