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 전체 > Molecular Biology-DNA > Southern Blot Analysis
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질문 플라스미드 dna 추출 후 전기영동결과 해석
알Beliver(과기인)  |  2018.10.11 18:16
첨부파일 파일첨부: 1539243453192.jpg (33 KB)
이미지 첨부파일
전기영동을 처음 해보아서 결과해석하는 방법을 잘모르겠어서 질문남깁니다.
Band를 확인할때 band크기가 두껍고 얇은데, 레더랑 비교해서 크기를 확인할때 걸린 위치를 밴드윗부분을 기준으로 하나요 아래부분을 기준으로 크기를 측정하나요?
생각해보았을때 아래부분을 기준으로 해야 걸려서 더이상 못내려온것이니 내려온부분을 크기로 볼수있을 것같기는 합니다.
또 plasmid dna extraction과 total dna extraction의 목적이 다른건가요? 실험방법은 비슷한것같은데 차이가 무엇인지 궁금합니다
#전기영동
 
#해석
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
bu  |  2018.10.11    
전기영동을 몇 분 동안 하였나요? 레더의 밴드 밴드 사이가 좁은 것으로 보아, 충분한 시간을 두고 하지 않고 빨리 끊어서 (조급함), 좀 그렇네요.



ㅎ하지만, 단백질 검출 밴드는 저마다 오로지 하나씩 만 보이는 것으로 보아 상당히 정확한 프라이머로 오로지 하나의 스피시픽 밴드만 검출되네요 (희소식).



ㄷ다시 내려 보세요. 충분히 시간을 두고. 굳이 안하더라도, 지금 검출밴드 옆에 걸려있는 딱 하나의 레더 밴드가 보이긴 합니다만...
알Beliver  |  2018.10.12   
어떤 건지 밝혀내는것보다 밴드가 뜨는지 관찰하는게 목적이어서 시간은 오래내리지 않았구요
궁금한것은 밴드크기관찰할때 두께가있어서 윗부분을 기준으로 레더를 봐야하는지 아래부분을 기준으로 레더를 봐야하는지 궁금합니다!
개구리Hightop  |  2018.10.12   

DNA는 밑 부분, 단백질은 윗 부분을 기준으로 크기 확인하시면 됩니다.

대왕개구리SPEED  |  2018.10.12   
agarose 전기영동은 PAGE 보다 gel pore size가 크기 때문에 정확한 분자량 측정에 어려움이

존재합니다.

PCR product의 전기영동 목적은 주로 증폭 후 예상되는 크기가 있기 때문에 PCR이 잘 되었는지 

전기영동 gel에서 예상되는 크기의 마커 주변에서 확인하는 것이고 정확한 분자량을 측정하는

것은 아닙니다.

DNA의 경우 전기영동 band의 두께 절반 위치를 기준으로 대략적인 분자량을 계산하면 됩니다.

그리고 DNA 분자량을 조금더 정확히 측정하려면 일반 확인용 gel 말고 따로 만들어서 사용하면

됩니다.

그리고 DNA 양도 확인 가능한 최소양으로 loading 합니다. loading양이 많으면 분자량 보다 아래로

내려갑니다.
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