실험 Q&A Immunology > etc.
gst 정제 도와주세요ㅠㅜ
레벨1 bbc (과기인)
Binding buffer : 10 mM sodium phosphate, 150mM NaCl, 1mM DTT (pH 7.5)
Elution buffer : 50mM Tris, 10mM GSH, 1mM DTT (pH 8)
정제 순으로는
1. binding buffer로 cell pellet resuspension, sonication 90% 10s, 40min(ice)
2. lysate filtering
3. column에 injection
4. elution
5. 정량 및 western blot으로 확인
으로 진행하는데 lysate를 filtering하고 몇분 안지나서 debris같이 뭔가 생기고 떠다닙니다...
ge healthcare에 학술문의 한 결과
제 traget protein이 aggregation되는 것 같다고 refolding or native page 진행하라고 합니다.
우선, lysate에 존재하기에 refolding은 할 수 없을 것 같아 native page를 진행하려고 합니다.
native page를 진행해도 근본적인 문제를 해결할 수 없기에...ㅠㅠ 문제해결 좀 도와주세요!
이럴 경우에는 cell lysate만들고 어떤 과정을 거쳐야 aggregation or debris가 생기지 않고
잘 정제될 수 있을 까요?
현재 저 혼자 실험을 담당하고 정제 관련 아시는 상사분들이 없어.. 혼자 끙끙거리고 있습니다.ㅠㅠ
저도 이런 현상은 처음이다 보니 어떻게 풀어나가야 하는지 알수 없어 막막합니다.
도와주세요ㅠㅠ
Bio마켓 프리미엄