실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > DNA Modification
taq과 pfu
?? (비회원)
4kb gene을 pcr하고 벡터와 서브 클로닝 후 클론 시퀀싱했더니 몇군데 mutation되었습니다. pfu가 taq보다 훨씰 muation발생률이 낮다는 것을 읽고 다시 해보려구요 헌데 taq으로 한 pcr조건으로 pfu를 사용했더니 타겟사이즈의 밴드가 안보여요. taq사용시 특정 온도로 했을때 밴드가 단일밴드로 잘 나왔었는데요. pfu로 할때는 조건을 새롭게 잡아야할까요?? 벡터와 서브클로닝 된 진을 모두 pcr한 것은 아니구요 gene만 pcr할때요. denaturation 94도/30초 annealing 59도/1분 extension 72도/4분 조건에서 taq으로 했을때 타겟사이즈도 단일밴드 있어서 일루션후 엔자임 잘라 라이게이션 해서 클론 획득했엇거든요. 동일 조건으로 단지 taq대신 pfu썼는데 밴드가 이상한 사이즈가 여러개 보일뿐 타겟 사이즈는 없더라구요. 어쩌죠??
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