[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
2019 Bio Top5 인터뷰
스폰서배너광고 안내  배너1
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Omics > Genomics
조회 4675  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 PET-15b벡터
올챙이퉁기퉁기(과기인)  |  2018.10.04 18:56
제가지금 pET-15b벡터에 PCR결과 얻은 DNA를 Ligation 시키려고하는데 형질전환이 잘 되었는지 결과로 blue-white screening'쓸수있나요? Lac효소쪽은 제한효소로건드리지않아서 가능할것같은데 맞나요? 근데 이거로는 플라스미드가 cp cell로 잘들어갔는지만확인할수있는거고 원하는 DNA가형질전환된 플라스미드가 들어갔는지는 확인불가능인가요?
#벡터
 
#Blue-white screening
 
#Pet-15b
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
그냥  |  2018.10.04    
유전자를 삽입한 MCS에 효소 site가 없으니 그 자리에 유전자가 들어가고 들어가지 않고의 여부에 따라 Blue, White Colony를 구별할 수는 없습니다.
일반적으로 Double Cut을 통해 넣어주게 되면 Self-ligation확율이 거의 없어 항생재를 넣은 Plate에서 뜨는 Colony는 정상적으로 재조합 된 Plasmid가 들어간 Colony일 확율이 큰데요, 결국에 정확한 확인은 결국 Colony Picking이후 키워서 Plasmid를 뽑아 Digestion Pattern확인, Sequencing 방법밖에는 없습니다.
대왕개구리SPEED  |  2018.10.04   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

pET15b는 blue/white 선별용 vector가 아닙니다.

vector에 있는 Lac I gene을 보고 Lac Z gene으로 착각하신거 같은데

Lac I gene은 T7 promoter 하류에 있는 Lac O 부분에 결합하는 repressor를 생산하는 유전자

입니다.

따라서 현재 실험에서는 cloning 후 colony PCR이나 직접 vector를 분리한 후 제한 효소로

잘라 insert를 확인하는게 좋을 듯합니다.

대왕개구리안재진  |  2018.10.05   
colony pcr을 하면 조금더 편하게 insert 유무를 확인할수 있습니다.

저는 1colony를 증류수 100ul에 풀어주고 boiling후 이거 1ul를 template로 PCR을 진행합니다.
밴드가 나오면 insert가 들어갔는지를 확인할수 있습니다.
답변하기
할인행사 광고 검색광고
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
Eppendorf New 25mL Conical Tubes : 혁신적인 디자인과 다양하고 편리한 사용 (4.1까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
5/6  좌우
406,000386,000
98,90094,000
178,700170,000
162,500154,000
98,10093,000
671,700638,000
242,400230,000
50,00048,000
136,000129,000
81,30077,000
39,40037,000
153,100145,000
264,400251,000
51,50049,000
217,600207,000
28,00027,000
107,900103,000
53,70051,000
37,60036,000
415,400395,000
120,900115,000
77,20073,000
80,40076,000
75,40072,000
최근등록   더보기 >
국내에 실험도구 수리하는곳이 있을까요?   01.24
dextran sodium sulfate 제조   01.23
western blot 시 denaturated protein에 antibody가 어떻게...   01.23
EMT6 세포주 분양 요청드립니다.   01.23
LPS와 샘플 병용처리시 일어나는 cell death   01.23
suspention cell U937 알려주세여~   01.22
세포의 최소 배양조건이 있을까요?   01.22
mouse xenograft tumor tissue FACS   01.22
기본적인 세포실험 관련   01.22
Cell 더 잘 푸는 노하우!   01.22
데일리파트너스
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS