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레벨5
Crystallographer
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18.09.03 18:49
CD8만 보시는거면 굳이 중요한가요..?
1) Specific 한 peptide가 있다면 peptide stimulation을 하시지, PMA로 하는 이유가 있나요? PMA의 signal은 non-specific 하고 peptide stim 했을때 약하게 나올 경우나 쓰는걸로 알고 있습니다. 이런 경우는 다른 cell이 더 activation되어도 biologically explain 하기 힘들지 않을까요
2) CD8을 보는거라면 recombinant IL-2를 같이 넣어 주는것도 중요합니다.
3) IFN-v의 antibody concentration은 생각보다 낮을수록 좋습니다 (1:400 에서 더 좋습니다). 정 걱정 되시면 1:250이랑 1:400이랑 시도해보세요.
4) 또 다른 방법은 tetramer binding을 보여주는 것도 한가지 방법이겠네요.
FACS plot을 첨부해서 어떻게 gating 했는지 보여주면 더 도움이 될것 같습니다.
https://cafe.naver.com/fcsuc
이곳 사이트도 도움 많이 되더라구요.