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질문 정제한 단백질에 효소처리에 대해서 아시는 고수분들!
올챙이또뚜집사(대학원생)  | 2018.08.23 16:23
제가 앞전 선배가 하시다가 가버린 실험을 맡게 되었는데요,

어떤 물질을 저희가 과발현 하여 그 물질만을 정제하여 SDS-PAGE 및 Western blot에서 확인했습니다. 
그 물질에 prolyl endopeptidase 라는 효소 처리를 하여 his/pro의 cut된것을 보고자하는데,
도무지 실험방법을 잘 모르겠습니다.
심지어 prolyl endopeptidase 제품의 본사에서는 그 물질을 단백질로만 만든거지 효소 활성처리에 대하여 실험하지않았다고 합니다. 그래서 조건, 방법, 계산 전부 다른 논문을 보고 참고하거나 자신들이파는 샘플을 사서 해보라고만 하는데요ㅠ.ㅠ

다른 논문들도 다 제각각이고, 보통은 효소를 제작하여 활성만 보는실험을 했는데
감이 잡히지가 않습니다..ㅠㅠㅠㅠ 그냥 농축한 sample에 효소를 넣고 기질 넣으면 되는건가요?ㅠㅠ

정제해놓은 단백질에 효소 처리를 한 뒤, 제대로 잘리었는가에 대해 SDS-PAGE로 확인하고싶은데,
실험 protocol이나 이러한 실험의 과정에 대해 잘 아시면 답변 좀 꼭 부탁드리겠습니다..
#단백질 효소
 
#prolyl endopeptidase
 
#효소 활성
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
ㅡ.ㅡ;  |  2018.08.30    

판매회사에 정확한 활성도를 문의해 보세요.

그냥 단백질을 만들어 판거라면 잘못주문하셨네요.



효소의 경우 특정 buffer condition이 있을텐데...이를 모르고 그냥 substrate에 때려넣는다고 반응이 일어나지 않을테니까요.


polymerase만해도 cofator로 2가 이온만 없어도 전혀 활성이 없어 반응이 안되는것처럼요.

올챙이또뚜집사  |  2018.09.01   
제가 다시 확인하니 확실히 효소 카테고리에 있던 제품이고 효소가 맞다고합니다ㅠㅠ

활성실험을 하지 않았다고, 논문만을 참고하라는 본사의 답변에 참 답답합니당ㅠㅠㅠㅠ

혹시 효소 활성 실험 과정이 어떻게 되는지 알 수 있을까요?
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