[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
이 주임의 정부과제 수행기
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 7408  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 큰size 단백질의 western blot 질문입니다..도와주세요..ㅠㅠ
western ㅠㅠ  | 2008.08.05 19:14
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
안녕하세요, 석사1학기 학생입니다.. ^-^;;

western blot을 하고있는데요..
맨 처음단계부터 어렵게!!어렵게!! 조건을 잡아서 열심히 실험중에 있습니다..


제가 지금까지 봐왔던 단백질 사이즈는 약 70~75KDa정도 이구요..

12% gel에서 SDS-PAGE 하고,,

transfer는 NC membrane사용 / 100V / 1hr (BIO-RAD 탱크타입) 으로 했습니다.

transfer 후, 폰슈염색해서 단백질들이 잘 옮겨가있는것을 확인했구요..

70~75KDa정도의 size는 western 결과도 아주 잘 나왔습니다..


그런데 문제는....

위와 같은 조건으로 했을 때 90~100KDa 정도의 사이즈와 380KDa 정도의 사이즈는 계속 결과가 나오지 않는다는 것입니다.

그래서 gel %도 5% / 8% / 10% / 12% 로 바꿔가면서 사용도 해보고,,,

transfer 조건도 100V 1hr / 100V 2hr / 35V over night 으로 바꿔가며 실험해보았습니다...

브릭사이트를 뒤져가며 거의 모든 방법으로 실험을 해보았지만...결과가 나오지 않습니다....


사이즈가 너무커서 transfer가 되지 않은것인지.... 아니면 다른 문제가 있는건지.......
도무지 알수가 없습니다.....ㅠㅠ


90~100KDa 정도의 사이즈와 380KDa 정도의 사이즈의 단백질을 대상으로 실험해보신분 계시면 방법좀 알려주세요....ㅠㅠ


너무너무 감사드립니다....ㅠㅠ
#western blot
 
# transfer
 
# 큰size protein
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리ryan  |  2008.08.05   
size 90~100kDa정도는 8%정도의 gel로 내린후 1시간 transfer하시면 됩니다.
transfer시 전류는 단백질 size에 관련되서 변화를 주는 것이 아니라 전체적인 gel size에 대해 바뀌는 것입니다. 가로x세로x0.8+10mA를 기본적으로 사용하는 것으로 알고 있습니다.

사이즈 380kDa은 잡아본 적이 없지만 240을 잡은 기억으로는 8%gel로 하고, transfer는 2시간정도 한것 같습니다. 역시 전류는 일정하고요,
marker가 380kDa부근을 가르키는 size가 있다면, 그것이 transfer되었는지 확인해보세요.

좋은 결과 있으시길 바랍니다^^
개구리방랑범생  |  2008.08.06   
97Kda으로 Western을 해봤습니다만 저 같은 경우 12% gel을 사용 했고 transfer는 50V로 O/N 했습니다. 저 역시 Tank type이었구요..

90~100Kda도 size가 큰 편인데 380Kda이면 로딩했을 경우 comb을 빠져 나왔을 지도 살짝 의문이네요.. 제 생각엔 380Kda정도면 다른 protein보다 시간을 1.5배~2배가량의 시간을 더 두고 로딩을 해야 Gel 상에서 밴드가 확인이 될 것 같네요.

로딩 시간에 관해서는 정보가 없어서.. 혹시나 하는 맘에 글을 올려봅니다.
western ㅠㅠ  |  2008.08.07    
자세한 설명 너무너무 감사드립니다!!!!

밴드가 조금씩 조금씩 보이기 시작했어요!@@@@!!!!ㅋㅋ ^-^

이제 조금만 더 조건을 잡으면 될 것 같습니다.!!!

너무너무 감사드립니다!!!! ^-^

오늘은 기분이 날아갈 것 같습니다!!!!ㅎㅎㅎㅎ^-^ 감사합니다!!! ㅎㅎ
답변하기
할인행사 광고 검색광고
바이오디 바이오디
Wet 방식의 장점에 속도와 편리함까지 지닌 eBlot & eStain 파격 할인 (8.31까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
TECAN 한국대리점 20주년 기념 할인 행사 (12.31까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
nanoString & COVID-19 / 다양한 Cloning application에 적용 가능한 com... (8.27까지)
케이비티 케이비티
[KBT] Thermo Shaker, Sonicator, Mixer, Heating Block, Rotato.. (8.16까지)
브래디 브래디
초저온라벨 등 실험실용 풀칼라프린터 (COVID-19 안전사인 지원) (8.30까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN] Reading과 형광 Imaging을 하나의 장비로 한 번에!! [Multi-mode micr.. (8.31까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
qPCR/PCR 셋업을 자동분주기로 개선해보세요. : epMotion5070PCR (8.8까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
2/6  좌우
482,000
49,000
739,000702,100
493,000
125,500119,300
136,000129,200
468,000
93,20088,600
6,000
130,500124,000
339,400322,500
139,000132,100
79,50075,600
17,000
23,000
92,30087,700
52,60050,000
482,000
66,50063,200
109,000
47,20044,900
773,000734,400
143,800136,700
370,000
최근등록   더보기 >
plasmid DNA mini prep 질문 있습니다   08.08
마우스 보정 후 안구 이상   08.07
Raw cell이 well에 잘 안붙는것 같아요   08.07
Bacillus 속에서 flagellin을 분리할때 dialysis membrane을 어떤...   08.07
크로마토그래피가 너무 어려워요   08.07
RT-PCR allelic discrimination 해석 도움받고 싶어여   08.07
EMSA 실험을 준비중입니다   08.07
ELISA 스탠다드 그래프   08.07
실험 정보 좀 도와주세요   08.07
mRNA full sequence를 transfection 하는데 효율이 괜찮을까요??   08.07
과학기술정보통신부
실험관련연재
박은총 연재중후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
Mr.S 연재중의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재중실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크