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질문 transformation 문제를 좀 알려주세요!!
올챙이rhksdn(대학원생)  |  2018.08.20 17:58
plasmid를 DH5a인 E.coli에 transformation 시켜 library제작 과정에 있습니다.

30kb를 10개로 잘라서 약 3kb씩 transformation시켜 보관하려고 하고 있습니다.

3kb sample은 1번 부터 10번까지 다른곳에서 만들어져서 저는 클로닝하여 보관하기만 하는 작업만 맡게되었습니다. 

그런데 마지막 10번 sample은 700bp입니다. 

각 sample들은 이미 pblueskcipt KS 2 라는 vector에 들어가 있는 상태로 받았습니다. 전부다 클로닝 전에 제한효소 사용하여 확인하여 보았습니다. 

sample은 문제 없는 것같은데 

마지막 10번 sample이 transformation 후 다시 plasmid 추출하여 sequencing 확인해보면 2번과 똑같다고 나옵니다. 이상해서 다시 sample을 받았는데 또 똑같이 나오네요. 

transformation방법은 heat-shock방법을 사용하였고 30초 정도 진행하였습니다.

동일한 방법으로 다른 sample들은 다 정상적으로 되었는데 마지막 부분이 안되는데 뭐가 문제일까요?? (sample은 virus sample 입니다.)
#transformation
 
#cloning
 
#plasmid
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대왕개구리강시  |  2018.08.21   
10번 샘플을 transformation하여 plasmid를 분리해보니 2번과 같더라....
그러면 2번이 맞는 겁니다.
클로닝을 한 사람이 잘 못 만든거지요.
보내준 사람한테 너네가 확인 해달라고 요청하세요.
잘못 보내온 플라스미드의 문제이지 transformation의 문제는 아닙니다.
앞다리다알순없어  |  2018.08.21   
10번만 길이가 다른데, 시퀀싱하면 2번이랑 같다..

1. restriction 후 insert size가 확인되었겠지요?
2. 3kb 정도이니 full-sequencing 결과인것이죠?
3. 10개로 자르는 과정에서 overlap(repeat sequence) 될 가능성이 있는 시퀀스인지요?

크기가 다른 샘플이니 제작 과정중에 오류를 찾을 수 있을겁니다.
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