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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 taqman qpcr 진행시 primer(f/r)의 유무가 궁금합니다
올챙이앙재문(과기인)  |  2018.08.17 11:27
안녕하십니까 선배님들

허접한 질문이지만 이해가 안되어서 질문드립니다...

abi taq man probe를 통한 qpcr 진행시


taq probe assay + master mix + template 만으로 볼 수 있는 것으로 알 고 있습니다.

그런대 간혹 보면 위의 프로토콜에 + @로 f/r primer를 첨가하는 경우도 있는데 이경우는 왜그런 것이며 무슨 차이가 있는지 궁금합니다!

주말 잘보내시고 답변 감사드립니다
#qpcr
 
#probe
 
#taq
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리절대교주  |  2018.08.17   
지금 그 키트가 뭔지 확실히 모르겠는데... 카탈로드 넘버라도 남겼으면 좋겠지만...

qPCR이라는 개념이 해당 유전자의 발현도를 보는 건데...

키트에 특정한 프라이머가 잇으면 안넣어도 되는 것이고...

있더라도 같이 보고 싶은게 있으면 넣어서 쓰는건.....본적이 없는데....? 있나?

제가 아는 프리믹스는 프라이머는 없고 버퍼+텍만 있어요.

그래서 보통 원하는 프라이머를 따로 넣거든요?

프로브는 뭔지 모르겠는데... 증폭하면서 DNA에 뭐 붙이는 건가요?

이런 질문은 가능하다면 카탈로그 넘버를 남겨주는게 센스입니다.

그거 참고해서 말하기 편하거든요.
올챙이앙재문  |  2018.08.17   
말씀 감사합니다!

TaqMan™ Universal PCR Master Mix

카탈로그 번호:  4304437

이것 과

보고자 하는 cDNA Template

그리고 taman probe assay(IL6라던지 기타 등등...)

으로 발현도를 보았었습니다.

그런대 Taqman master mix의 가격이 비싸서 다른 probe base master mix를 알아보고 있던 중에 

Luna® Universal Probe qPCR Master Mix (M3004) (https://www.neb.com/-/media/catalog/datacards-or-manuals/manualm3004.pdf)

보았고 프로토콜을 확인해보니 F/R Primer가 필요하다고 적혀있어서 여쭙게되었습니다.

제가 공부를 물론 더 해야되지만 찾던 중 아직 이부분이 이해가 안되서 이렇게 여쭙게되었습니다.

감사합니다. 




궁금  |  2018.08.17    

Primer 없이 Taqman Probe qPCR이 가능하다구요?

정말 놀라운데... 정보 좀 주세요... Prime가 Master mix에 들어있는게 아니죠?

쇼킹하네요

올챙이앙재문  |  2018.08.17   
TaqMan® Universal PCR Master Mix (2X) 25.0 10.0 1X TaqMan® Gene Expression Assay (20X)† † See www.LifeTechnologies.com for TaqMan® Gene Expression Assay information. 2.5 1.0 1X cDNA template + H2O‡ ‡ Use 1–100 ng of cDNA plus RNase-free water. 22.5 9.0 1–100 ng Total Volume 50.0 20.0 —

taqman master mix 사용시에는 본 프로토콜대로 이용하였습니다.
따로 프라이머 없이 발현량 보려는 probe assay와 cDNA 만 섞어주어 발현량 보았습니다. (지금까진 게속 이렇게 해왔고, 문제는 pcr master mix가 5ml에 80만원이라는 너무 비싼 가격때문에 다른 master mix를 찾고 있는 중이였습죠...)
qwerty  |  2018.08.19    
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
위의 두 제품 모두 2X master mix로 반드시 F/R primers가 필요합니다. 사용중인 taq probe assay에 F/R primers와 hydrolysis probe가 포함되어 있으므로 NEB의 master mix와 같이 사용 가능합니다. 만일 taq probe assay를 사용하지 않을 경우 specific F/R primers와 probe (hydrolysis 또는 다른 형태의) 또는 SYBR Green이 필요합니다.
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