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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 rt kit에 들어있는 enzyme이 녹아있네요....
올챙이야생의잉어킹(대학원생)  | 2018.08.16 23:31

현재 miRNA qRT-PCR 하고 있습니다.

-20도 냉동고 몇 번 열었다 닫았더니+방에 에어컨이 잠깐 꺼진 사이에 rt kit 속 구성품인 enzyme이 녹아있네요..... 참고로 Qiagen miScript RT kit 사용중입니다.
키트 속 다른 것들은 안 녹아있었고, enzyme은 녹은 지 두시간? 정도 된 것 같기는 합니다.
일단 사용할 만큼 사용하고 다시 냉동고에 넣어두어도 잘 안 얼길래, 잘 포장해서 다른 -20도 냉동고로 피신시켜 두었습니다.
배우기로는 enzyme이 최대한 차갑게 유지되어야 한다는데....  이 enzyme이 정말 온도에 많이 취약한가요?

일단 지금 rt는 돌아가고 있고 내일 아침에 qPCR 돌려서 확인은 해볼 예정이지만, 만약 그렇다면 kit를 폐기하고 다른 것을 사서 써야 할까요?ㅠㅠ 사고 나서 한두 번 사용한 것이라 아깝네요 ㅠㅠㅠㅠ
경험 많으신 분들의 이야기 듣고자 합니다. 감사합니다.
#qRTPCR
 
#enzyme
 
#-20도
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
앞다리오치  |  2018.08.17   

경험상 kit 품목이 약 두시간 정도?! 상온에 노출되어 있었다고 하더라도 이후에 관리 잘 하시면 크게 문제는 없을 것 같습니다.

저도 과거에 비슷한 제품을 상온에 방치하여 퇴근한적이.....

다행히 추후 실험 결과에도 큰 영향을 주지 않았습니다.

현재 실험 결과를 확인해보시고 판단하시면 될 것 같습니다.

올챙이야생의잉어킹  |  2018.08.17   
질문자입니다.
밤새 냉동고에 둬봤는데 kit 내 다른 품목들은 다 얼어있는데도 enzyme만은 꿋꿋이 안 얼어있네요 ㅎㅎㅎㅎㅎㅎ ㅠㅠㅠㅠ
구글 뒤져보니 가끔 점성 높은 물질이 저온에서 얼지 않고 과냉각되는 현상도 있다고 하고...
상온에서 두셨을 때도 살아있었다니 희망이 생기네요 일단 냉동고에서 꺼내진 않았으니+다른건 꽁꽁 얼어있으니 믿어보고 사용해보겠습니다 ㅎㅎ

개구리Hightop  |  2018.08.17   

아마 대부분의 효소류는 보관 용액에 50% 글리세롤이 포함되어 있어서 영하 20도에 얼지 않는걸로 알고 있습니다. 잦은 냉해동은 단백질에 좋지 않은 영향을 미치기 때문에 아예 얼지 않게 처리를 하는 것이죠.

개구리절대교주  |  2018.08.17   
효소가 있는 바이얼의 경우 버퍼에 효소 안정화 목적으로 이것저것 들어가 있는 경우가 있어요. 흔히 글리세롤이 들어가 있어요. 그럴 경우 어는 점이 많이 낮아집니다. 장시간 보관을 위해 -20도보다 낮은 온도에서 보관되어 온경우 얼려져 오는 경우가 대부분입니다. 그래서 보통의 냉동고에서는 잘 얼지 않는 것이니 문제는 없습니다. 다만 너무 얼었다 녹았다 하는 것은 activity를 감소시킬 수 있으니 조심하시구요. -20도에서 차갑지만 얼지 않는 것이 이상적입니다.
알DASgesunde  |  2018.11.07   
상용 enzyme이라면 얼지 않고 끈적한 용액상태로 있는 게 정상입니다.
단백질의 경우 freeze-thaw 과정에서 변성되기 때문에, glycerol 등으로 안정화시키는데 이로 인해 ㄷ 동결 자체가 잘 되지 않습니다.

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