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항상 kit 처럼 나올 수는 없어요.standard curve 를 그려봐서 잘나오면 잘된걸로 판단될 거같아요.
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레벨2
naregi
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18.08.13 19:15
capture coating하실때 버퍼조성이 어떻게 되세요 ?
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레벨1
석사꾸러기
(과기인)
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18.08.14 10:15
ELISA coating buffer는
R&D system회사 제품 (cat no.: DY006)을 사용했습니다.
멸균 필터링한 PBS라고 나와있습니다ㅠㅠ
제 경험과 비슷한 경우인 것 같아서 추가 답변 드립니다.
kit를 이용하여 ELISA 진행 시 저는 보통 RnD 제품을 많이 이용하였는데
이 때, BSA를 제작해서 쓴다던지 substrate를 타제품의 TMB를 사용하여 진행하였었는데
이 때에도 kit에서 제공하는 standard OD값보다 굉장히 낮은 값을 detection 하였습니다.
그래서 BSA와 substrate를 RnD 자사품으로 바꾸고나서 비교 실험해봤는데
kit에서 제공하는 standard OD값과 유사하게 나왔습니다.
아마도 실험자님께서 kit에서 제공하는 buffer 의외에 제작이나 타제품을 이용하셨을텐데...
비슷한 경우가 아닐까 싶습니다.
만약 RnD 제품을 쓰신다면 지금 제가 진행하는 protocol은 kit에서 제공하는 방법을 따라하고
blocking 과정과 sample 희석과정에서만 자체 제작한 1% BSA(in PBS)를 사용하며
나머지 detection antibody나 HRP step 자사제품인 BSA를 사용하며
마지막 substrate 역시도 자사제품을 사용합니다.
그렇게 했더니 standard OD값이 kit에서 보여주는 값과 유사하게 나왔습니다.
한 번 kit 자사제품과 제작 및 타사 제품의 buffer를 잘 조합해보시길 바랍니다.
좋은 실험결과 얻으시길 바라겠습니다.
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레벨1
석사꾸러기
(과기인)
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18.08.20 09:46
답변 주셔서 감사합니다^^ 말씀해주신 부분들 참고하겠습니다.
감사합니다~!