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https://www.neb.com/applications/cloning-and-synthetic-biology/site-directed-mutagenesis
site-directed mutageneiss로 해도 되기는 한데
어차피 primer 합성해야 하니깐.. 그냥 새로 다시 합성해서 클로닝 다시하는것이랑 별 차이 없으리라 생각됩니다.
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레벨2
클로닝ㅗ
(대학원생)
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18.07.30 10:30
다시 합성하는 거 말고 혹시 실험적인 방법 아시는 분 있으실까요? DNA 합성하는데 시간이랑 돈이 많이 들어서.. PCR 로 작업할 수 있는 방법 찾고있습니다
그러면 Quikchange Site-directed mutation kit를 써보세요.
키트가 편하지만 키트 굳이 안써도 pfu랑 deletion에 맞는 프라이머만 있으면 됩니다.
자르고 싶은 베이스에 맞춰서 프라이머 F, R 짜신후
mutation pcr 돌리면 원하는 산물이 나올겁니다.
다음에 Dpn I으로 nick생긴 기존 DNA 자르고
박테리아에 TF한뒤 colony pick 하여 sequencing돌리면 됩니다.
Quikchange site에서 primer 짜는 프로그램은 있으니 그걸로 deletion primer짜시면 되겠습니다.