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질문 H2O2 treat 농도 계산 질문이요 ㅠㅠ
올챙이heb(과기인)  | 2018.07.05 21:53
30% H2O2를 최종농도 1mM로 하려고 합니다.
H2O2는 9.8M로 잡았어요 (계산하면 9.79M인데 쉽게 사용하기 위해서ㅠ)

제가 농도 계산에 약해서 선배가 알려주신대로 하고 있는데 MTT 결과를 보면 답이 없습니다 ㅠㅠ

1. 9.8M인 H2O2를 1M로 희석
DPBS 898ul + H2O2 102 ul
2. 100mM로 희석
DPBS 900ul + 1번에서 만든 1M H2O2 100ul
3. 10mM로 희석
DPBS 900ul + 2번에서 만든 100mM H2O2 100ul
4. 1mM로 희석
DMEM 900ul + 3번에서 만든 10mM H2O2 100ul

이 다음부터 serial dilution으로 treat하는데 결과를 보면 한숨 나옵니다..
선배가 알려주신 방법대로 하는 게 맞는 건가요..ㅠㅠ
#H2O2
 
#농도
 
#시약
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리곰돌2  |  2018.07.06   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. dilution은 비율은 제대로 하셨는데, 결과가 어떻게 나왔기에 한숨이 나온다고 하시는지요?

2. H2O2는 사용할 때마다 새롭게 stock에서 희석하고 계시죠?

3. 처리시간에 따라 / cell density에 따라, H2O2 처리결과가 많이 달라질수 있습니다.

4. 제 경험적으로는 cell 에 따라 / 배양시간에 따라 다르긴 하지만, 0.2 mM~2mM까지 처리해서 산화적 손상을 유도했습니다.


올챙이heb  |  2018.07.06   
0  / 31.25 / 61.5 / 125 / 250 / 500 / 1000uM
1000uM을 제외하고 DMEM 500ul 넣고 serial dilution 하는데 잘못됐나요 ㅠ..??
개구리곰돌2  |  2018.07.06   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
stock을 serial dilution할때, PBS말고 그냥 DW로 해보시고요,
세포처리 전의 stock 농도를 1M 혹은 0.5M로 만드신 후,
바로 배지에 1000X / 500X 로 처리하시는것이 좋을것 같습니다.

10mM 을 10배 희석해서 세포에 처리하시면,
vehicle (PBS 혹은 DW) 비율이 너무 큽니다.

올챙이heb  |  2018.07.06   
감사합니다  :) !!!!
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