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 전체 > Laboratory Animals > Blood
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질문 FACS blood sample처리 시
알이늉(대학원생)  | 2018.06.26 16:38
안녕하세요. 
facs를 이제 막 시작하는 학생입니다..ㅜㅜ 
마우스의 blood, 조직을 이용해 facs를 찍으려고 합니다. 
조직의 경우는 제가 생각했던것처럼 cell이 잘 나옵니다. 

문제는 blood인데요.
edta를 처리한 tube에 채취해 RT로 유지해주고 혈장을 따로 채취해 실험해야하여 원심분리해 혈장만 따내고, 아래 가라앉은 혈구에서 cell을 채취해야합니다.

1. 혈장을 제거하고 가라앉은 혈구에 lysis buffer를 넣고 잘 suspenstion해 방치해준다.(약 10~15분)
2. 원심분리를 돌린다.
3. RBC가 깨지고 아래 pellet이 형성된다.
이때 3.에서 pellt은 커녕 lysis가 된 것 같지 않습니다. 
마치, 혈구가 다시 엉겨 가라앉은 느낌입니다..ㅜㅜ 


whole blood에선 cell이 보였는데,, 혈구에선 어떻게 해야할까요? 
제가 한 방법이 잘못된것일까요..? ㅜㅜ 도와주세요.. 
#blood
 
#facs
 
#lysis
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
미르  |  2018.06.26    
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
혈구를 다 모아서 그 중에서 백혈구만 보려고 하시나요?

그럼 RBC가 너무 많을텐데요. 그래서 RBC lysis buffer 쓰는 것 같긴한데...

백혈구만 모으려면 gradient 걸어서 모으는 게 나을거에요.
알이늉  |  2018.07.03   
엇.. 그럼 혈장을 제거하고 나서 buffy coat과 아래 혈구 일부만 소량 따내서 lysis buffer로 lysis하면 cell이 보일까요..? (백혈구에서만 보려는 것은 아니라 RBC만 제거되면 괜찮긴합니다..)

1*10^7cell/ml로 cell을 계산하려하는데 이때 cell은 어느정도 나올까요..? ㅜㅜ 

답변 감사합니다!!
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