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RNAlater 용액에 넣어서 deep freeezer에 넣기 전의 과정에서 문제가 생긴 것 같습니다. RNAlater가 조직에 충분히 침투되어 안정화된 상태에서 얼리거나 해야 하는데, 덩어리가 좀 크거나 큐티클 층이 있는 경우면 2-3mm 크기로 잘게 잘라서 넣어줘야 합니다. 또 물기가 많거나 지방질이 많은 조직에도 적합하지 않다고 나와 있습니다.
그런데, 애초에 deep freezer가 사용가능했다면 RNALater를 쓸 이유가 없지 않나요?
제가 알고 있는 RNAlater 사용방법은 샘플한 조직을 RNAlater에 넣은 후 바로 냉동시키지 않고 4C에서 overnight 해준 후 RNAlater를 제거하고 나서 -20나 -70에 보관하는 것입니다.
세포라서 RNAlater침투는 상대적으로 잘 될거 같은데, 혹시 water로 세척하는 과정에서 세포가 손상되지 않았는지 좀 의심이 되네요. water로 세척하는 과정이 RNAlater 프로토콜에 나온 방법인가요? 아니라면 RNAlater 제거 후 water로 세척 없이 바로 추출 해 보시는게 어떨지요?