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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
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질문 RNAlater 처리 후 RNA 추출과정에서
알ss2k0335(대학생)  | 2018.06.25 18:57
안녕하세요?

식물세포에 RNAlater 200uL를 첨가하고 현탁하여 디프리져에 보관하였습니다. 그리고 일주일뒤 RNAlater와 함께 얼어있는 샘플을 녹여 원심분리후 Later를 제거하고 wash를 위해 RNase-free water 200uL를 첨가하여 vortex후 다시 원심분리해서 water를 제거 후 액체질소로 샘플을 갈고 trizol과 qiagen kit를 이용해 RNA를 뽑았습니다. 뽑고 나서 밴드를 확인하니 RNA가 심하게 깨져 스미어가 생겼습니다. RNALater를 쓰지않고 fresh한 상태에서 뽑은 것과 많은 차이를 보이더라구요ㅠㅠ 혹시 later처리에 문제가 있었는지, 보관의 문제인지, later처리과정의 문제인지 감이 잡히지않아 여러분께 의견을 여쭈어봅니다ㅠㅠ
#식물세포
 
#RNA
 
#RNAlater
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리느림보  |  2018.06.26   

RNAlater 용액에 넣어서 deep freeezer에 넣기 전의 과정에서 문제가 생긴 것 같습니다. 
RNAlater가 조직에 충분히 침투되어 안정화된 상태에서 얼리거나 해야 하는데, 덩어리가 좀 크거나 큐티클 층이 있는 경우면 2-3mm 크기로 잘게 잘라서 넣어줘야 합니다. 또 물기가 많거나 지방질이 많은 조직에도 적합하지 않다고 나와 있습니다. 

그런데, 애초에 deep freezer가 사용가능했다면 RNALater를 쓸 이유가 없지 않나요?
백야  |  2018.07.02    
제가 알고 있는 RNAlater 사용방법은 샘플한 조직을 RNAlater에 넣은 후 바로 냉동시키지 않고 4C에서 overnight 해준 후 RNAlater를 제거하고 나서 -20나 -70에 보관하는 것입니다.
세포라서 RNAlater침투는 상대적으로 잘 될거 같은데, 혹시 water로 세척하는 과정에서 세포가 손상되지 않았는지 좀 의심이 되네요. water로 세척하는 과정이 RNAlater 프로토콜에 나온 방법인가요? 아니라면 RNAlater 제거 후 water로 세척 없이 바로 추출 해 보시는게 어떨지요? 
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