[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
물리적 거리두기 실천
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
LABox-과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
조회 858  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 blood cell에서 RNA extraction
올챙이엔지에스(대학원생)  |  2018.05.28 22:12
안녕하세요.

blood에서 RNA extraction에 관하여 질문드립니다.


CD16a, CD16b, CD56 항원 클로닝을 하기위해 Primer design 후 Template로 사용하고자 Blood cell에서 RNA extraction을 진행하였습니다.

RNA 농도를 측정했을때 높게는 88.2ug/ml 정도로 측정되구요, 다른 경우엔 0.1ug/ml로 나옵니다..

여러가지 방법을 사용했는데 한가지는 Ficoll을 사용하여 PBMC만 추출했을때 RNA extraction 경우 농도가 상당히 높게 나왔습니다..

궁금한 점으로는 제가 오늘 RBC lysis buffer로 사용하여 RBC extraction을 했는데, 마찬가지로 농도는 0.2ug/ml로 나왔습니다. 왜 RBC lysis buffer를 사용했을때만 이렇게 낮게 나올까요..어디에 문제가 있고, 다른 선생님들께서 lysis buffer를 사용하여 RNA extraction 하는 다른 방법이 있을까요?

제가 진행한 실험 방법으로는
1. blood 10mL + RBC lysis buffer 40mL = 37도 incubator, 15min

2. Centrifuge 1000 rpm, 5min 후 cell 풀어줌.

3. RPMI 25mL 첨가 후 다시 centrifuge 1000 rpm, 5min (washing)

4. 3번 과정 반복.

5. 마지막으로 PBS 30mL 넣고 washing 1000 rpm, 5min

이렇게 진행을 하였고, RNA extraction 과정에서는 문제가 없다고 생각합니다.

혹시 실험실에서 비슷한 과정을 하시는 선생님이나 알고 계신 선생님이 계시다면 조언좀 부탁드립니다.

감사합니다.






#RNA
 
#bloodl
 
#cell
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리A'ANE  |  2018.06.01   
PBMC 를 따로 모아(농축하여) RNA뽑는것이 당연히 RNA농도가 높을 수 있구요


Trizol법을 이요하는 방법이 있는데 두가지가 있습니다


1) Phase saperation : 클로로폼을 사용한 전통적인 RNA 추출방법입니다

2) Trizol 샘플을 Spin-column으로 뽑는 방식인데 이는 전통적인 Phase saperation 방식과 비교했을때 샘플로스가 없는점과 Phenol성분을 제거해주는점, 그리고 편의성이 높은 방법인데요 Zymo Research사의 Directzol이라는제품입니다. (http://www.kyongshin.com/productview.php?pd_id=96)
답변하기
할인행사 광고 검색광고
케이비티 케이비티
Stirrer, Dry Bath, Shaking Incubator, Thermo Shaker 등 다양한 제품.. (6.31까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
1/6  좌우
339,000322,100
272,100258,500
153,100145,500
121,800115,800
139,400132,500
47,20044,900
86,90082,600
111,300105,800
67,10063,800
111,900106,400
195,700186,000
126,900120,600
60,70057,700
51,40048,900
1,676,8001,593,000
50,40047,900
92,30087,700
80,40076,400
154,700147,000
130,400123,900
62,00058,900
55,70053,000
276,800263,000
87,40083,100
최근등록   더보기 >
기기 차이   04.04
hemolysis activity의 positive strain이 궁금합니다.   04.04
미세조류(클로렐라) 배양 시 탄소원 문의   04.04
elisa   04.04
미생물 배양, 단백질 정제 화학지식?   04.04
hiv가 하루에 감염/제거하는 CD4+세포수, CD4+세포가 제거하는 hiv수   04.03
NI-NTA resin 공기 노출시 아예 사용못하나요?   04.03
프라이머 디자인에 대해서 질문드립니다.   04.03
Internal control이 exogenous로 따로 넣어줄 경우   04.03
PCR smearing 현상ㅠㅠ   04.03
국립암센터
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크