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미국포닥
(비회원)
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18.05.09 23:00
엠사라는 것이 디엔에이 바인딩 프로틴의 엑티비티를 보는 것인데요.
엑티비티가 있다면 피32로 테그되어있는 디엔에이와 바인딩하여 전기영동시 모빌리티가 떨어져 위와같이 위쪽에서 벤드를 형성합니다.
컨트롤이 몇게 필요한데요,
cold probe는 위에 설명이 잘 나와있는데, 이 필름에 잡힌 시그날들이 진짜 방사성동위원소에 의한 것인지 아닌지 보여주기 위한 것이고요.
mutant probe 는 어디에 뮤턴트를 만들었는지 몰라서 설명드리기 좀 그런데 ARE 이외의 부분에 만들뮤테이션이 있는 것이면 프루브에 포함된 ARE 에 Nrf2가 바인딩한거다 보여주기 위한 것이고
보통은 ARE 코어 부분에 뮤테이션을 넣어서 바인딩 안되는 것을 보여주는 걸로 알고 있습니다.
참고로 다른 컨트롤?을 사용하기도 하는데
위의 논문으로 치면 ARE가 포함되지 않은 프루브를 사용하는 네가티브 컨트롤입니다.
그리고 sampl로 cell extract 나 tissue homogenate 를 사용할 시, supershift 라고 해서 위 논문으로 치면 Nrf2에 대한 antibody를 하나 더 넣어서 벤드가 더 위에 형성하는 것을 보여줌으로써 이 벤드가 Nrf2-ARE 컴플렉스가 맞다를 보여주기도 합니다.
도움이 되었길 바랍니다