실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Southern Blot
vector construct 을 하려고 하는데 vector elution 이 안됩니다--^
답답해요 (비회원)
pCAMBIA vector에 유전자를 cloning 하려고 합니다.. 유전자와 vector를 miniprep 해서 enzyme 처리를 하면 유전자는 깨끗하게 cutting이 되는 반면 vector는 total 30㎕를 enzyme 처리했을 때 2㎕를 loading 해보면 cutting 상태가 DNA를 뽑았을 때 약간 더럽다는 느낌 처럼 cutting 이 된 것을 확인하고 (enzyme은 TAKARA의 KpnI과 SacI을 쓰고 있습니다) elution을 해보면 Southern을 하기위해 DNA에 enzyme 처리했을 때처럼 쭈~~욱 끌리게 나오는 것입니다.. elution은 Qiagen의 kit를 쓰고 있습니다.. 크기가 10kb가 넘어서 buffer도 3volume으로 넣어주었고.. 맨 마지막에 50도에서 10분간 배양 후 추출하였습니다. 어떻게 하면 vector를 제대로 cutting해서 추출할 수 있을까요?
Bio마켓 프리미엄