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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
조회 2031  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 antibody purification..
학생  | 2008.07.17 10:28
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
rabbit serum에 있는 IgG를 Purify하기 위해서
protein G sepharose 4 fast flow 를 이용해서 purification 하였는데
heavy, light chain 외에 band 들이 있습니다.

band 들의 원인이 혹시
시작할 때 serum을 filtration 해주지 않아서 일까요?
어떤 protocol 보니깐 filtration 과정이 있던데..
0.45um filter로요..

아니면 어떤 문제가 있어서 band 들이 나타나는 것일까요?
그리고 band가 있는 elution sample들을 다시 column에 걸어서 내릴수는 없나요?

serum이 얼마 되지 않고 귀한거라서요.

좋은 답변 부탁드립니다.. ㅠㅠ
#antibody purification..
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리엘피스  |  2008.07.17   
Antibody를 정제할때, serum의 filtration과 밴드는 크게 상관이 없습니다 (원심분리만으로도 충분합니다). wash를 충분히 잘해 주시면 해결될 문제입니다.

또 달리 생각해 볼 수 있는 것이 proteinG는 native 상태에서 albumin binding domain을 가지고 있습니다. 재조합을 이용해 발현정제한 proteinG가 아니라면 IgG heavy + light외에 albumin band가 함께 정제되어 나올 수도 있습니다. ProteinG의 설명서에 native인지 아니면 recombinant인지 표기되어 있는지를 확인해 보세요.

하지만 제 생각엔 serum을 column에 통과시킨 후 충분히 wash를 하지 않고 elution을 하여 발생한 문제로 판단됩니다.

IgG와 protein G가 붙는 것은 강한 affinity에 의한 것이고 elution은 낮은 pH에 의한 것입니다. elution한 IgG를 중성으로 적정하시고 다시 proteinG resin에 붙이면 잘 붙을 겁니다.
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