실험Q&A를 통해 여러분의 지식을 나누어 주세요. 답변을 등록하시려면 로그인 해주세요.
본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
-
미니오리
(비회원)
-
18.04.11 10:29
pGEM T vector네요
유전자는 LacZ 단백질의 알파 프래그먼트 부분입니다
alpha complementation 를 검색해보세요
cloning후
Blue White screening에 이용됩니다.
promoter는 T7과 SP6가 각각 양쪽에 존재하고 있고,
IPTG를 넣어 유전자를 발현할 수 있습니다.
그리고 둘다 자주 사용되는 seq. 이기때문에 DNA seq.을 의뢰할때 프라이머 지정에 용이합니다
제일 중요한게
TA cloning을 위한 T-end 부분인데
Taq polymerase를 이용한 PCR을 하면 results에 A 말단이 생깁니다 (A overhang)
이러한 A말단을 가진 PCR results에 특이성을 가지면서 ligation을 진행 할 수 있기 때문에
blunt end ligation보다 높은 효율을 보여줍니다
마지막으로 BstZi 제한효소 사이트인데 TA cloning site 양 옆에 자리하고 있죠
위에 말한 TA cloning 후 BstZi 제한효소로 처리하면
PCR results와 크기를 아가로스 젤 상에서 비교할 수 있습니다