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freeze-thaw 방법에는 CaCl2 버퍼에 보관한 competent cell을 이용하는 것이 일반적인 방법입니다.
그냥 LB에 넣고 해도 대게 잘 되긴 하지만, 보다 일반적인 방법으로는 LB에 o/n 배양한 Agro를 아침 일찍, 50배 부피의 LB에 다시 접종하여 OD가 0.5-1.0 사이에 이르면, 원심분리로 수확하고, 한번 씻은 후에, 마지막으로 20 mM CaCl2 (1/10~1/50 부피)에 부유시켜서 냉동보관하면 됩니다.
10% glycerol에 넣는 것은 전기천공법(electroporation)에 적용하는 방법입니다. DNA외의 이온함량이 높으면 DNA 말고 그쪽으로 흐르는 전류가 커져서 열 발생이 높아지고, 세포 손상이 있게 되며, DNA 전달량은 상대적으로 적어지기 때문에 비이온성의 보존제를 넣는 것입니다.