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 전체 > Molecular Biology-DNA > DNA Modification
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질문 플라스미드 분리 방법좀요..
알kep0213(중고생)  |  2018.03.14 20:57
고등 2학년인데 항생제 내성 유전자 실험을 하려고 해요.. 아직 조사를 더 해봐야되긴 하겠지만 우선 찾은 거로는 플라스미드 분리를 해야 한다고 하더군요.
그리고 굳이 이 실험이 아니더라도 많은 유전자 실험이 플라스미드 분리를 필요로하는 것 같던데 플라스미드 분리방법 고등학생 수준으로만 혹시 알려주실 수 있으신가요?
그리고 플라스미드 분리가 고2 수준으로도 가능한 건가요?
#유전자
 
#플라스미드
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알2mM  |  2018.03.14   

고2 수준으로도 가능하다고 생각됩니다.

몇종류를 얼마나 필요한지 몰라서 아는 대로 말씀드리면,
전형적인 옛날 방식대로 plasmid isolation을 하면 시약도 다 따로 만들어야해서 복잡합니다.

원리는 간단하게 말씀드리면
세포막과 세포벽을 부숴지도록해서, DNA를 pH로 변성했다가 복원을 시키는데,
상대적으로 큰 gDNA는 복원이 안되고 사이즈가 작은 plasmid DNA는 복원이 됩니다.
필요한 플라스미드만 PCI로 분리하고, 에탄올이나 이소프로판올로 침전시켜 사용합니다.
(PCI는 phenol : chloroform : isoamyalchol )
 
kit사용을 추천드립니다. kit에는 시약도 다 만들어져 있고, 필터랑 컬럼이 있어서 다 걸러주니..
G사의 mini prep kit는 200번정도 사용가능합니다. 리액션 양이 더 작은것도 있을 수도 있어요 !
plasmid DNA가 필요한 양에 따라 mini prep, midi prep...정도로 나뉘구욥


꽃개구리Applied_Microbe  |  2018.03.15   

대장균의 chromosomal DNA는 대장균의 세포내막에 일부가 부착된 상태로 되어 있는데.... 추출과장에서 acetate 성분에 의해서 pH 가 낮아지면서 단백질 (세포막, 세포벽, 세포소기관 등)들이 변성되어 응집되면서 chromosomal DNA가 같이 분리가 되고, plasmid DNA만 남게 됩니다. 추출과정에서 vortexing을 너무 오래할 경우 chromosomal DNA들이 심하게 조각나면서 plasmid DNA와 함께 추출될 수 있으므로 manual 에 따라서 추출 하셔야 합니다.

월드사이언스에서 나온 gene cloning 한글판 읽어보시는것도 좋습니다.

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