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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot blocking 상온에서 O/N
알박쥐오(대학생)  | 2018.02.06 22:47
 정신이 없어서 blocking(blocking solution은 5%skim milk in TBST)을 상온에서 O/N 해버렸내요....

아침에 와서 확인했을때 blocking solution은 남아 있어서 일단 primary O/N 하고

secondary 붙이고 detection했는대 band가 하나도 안나오내요..... 

폰슈 염색해서 확인 했는대 protein 어느정도 있는거 보니 transfer에는 문제가 없는거 같습니다....

blocking을 상온에서 O/N을 하게 대면 membrane protein이 다 없어지는지 

아니면 다른 과정에서 문제가 있는건지 질문 올려요~! ㅜㅜ

(수행한 western은 정상적인 방법으로 하면 band 잘 나옵니다~!.)
#western blot
 
#blocking
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이p....  |  2018.02.06   
Blocking을 O/N 해도 보통은 잘 나옵니다...
아마도 O/N하면서 Blocking Solution이 많이 증발한 것 같은데, 그러면 굉장히 고농도의 Blocking Solution에 담겨 있었을테고, 말 그대로 Primary Ab.도 붙지 못하는 상태가 되었을 수도 있습니다. 

다시 SDS-PAGE부터 하면 더 좋겠지만, 그럴 여건이 안된다면, 장시간 Washing하거나 아니면, Destaining Solution에 담가서 Blocking 했던 BSA나 Casein을 최대한 없앤다음 다시 정상적인 Western Blot Protocol을 수행하시면 될 겁니다. 
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