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지나가다...
(비회원)
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18.01.11 17:42
map을 올려주시면 더 좋았겠습니다..
제가 글을 이해한대로 말씀드리면..
갖고계신 벡터는 이미 MCS에 Cre유전자가 클로닝이 되어있는것으로 보여지네요. empty vector였다면 MCS에서 제한효소 사이트가 많이 있었겠지요
Cre는 loxp-Cre system 찾아서 공부하시면 잘 알게되실거고요...
Cre를 벡터에서 잘라내어서 다른 벡터에 옮기신다는건지.. 정보가 부족해서 더 말씀드리긴 힘들겠어요.
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레벨1
dbwpduddl
(대학생)
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18.01.11 21:08
제가 사용하고자 하는 pTAT-CRE vector map 입니다.
여기에 EcoR1과 Xho1을 이용하여 CRE 부분을 잘라내고 제가 원하는 DNA sequence를 넣어서 클로닝 해도 gene expression이나 protein 발현양에 대해 차이가 없는 궁금해서 질문 드립니다.
감사합니다.
vector map 출처 : https://www.addgene.org/35619/
상관없습니다.
backbone이 pET인것으로 보아 E coli에서 protein expression시켜서 정제용으로 사용되는 것으로 보여집니다.
앞에 달린 TAT은 protein delivery를 위한 CPP이구요. T7-tag은 affinity column사용해서 정제하기 위함입니다.
그런데 기본적인 개념을 혼동하고 있는거 같습니다.
MCS는 cloning을 위한것이고 CRE 는 recombination으로 expression을 mediated 하는 것입니다. (loxp)
Nco/Xho으로 잘라버리고 원하시는 gene 넣으면 expression해서 정제 할수 있으리라 생각됩니다. 그런데 구지 이것을 backbone으로 사용할 이유를 모르겠네요... empty vector를 사용해도 되는데..