[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 sale 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
검색광고안내
美사리 - 한국 연구자들을 위한 미국 비자, 영주권
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
조회 1234  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Ni-IDA 레진 regeneration과 단백질 정제과정에 대한 질문입니다.
개구리Hightop(과기인)  | 2017.12.04 11:45

안녕하세요?
제가 오늘 질문드릴 내용은 Ni-IDA 레진 regeneration과 단백질 정제에 대한 것 입니다. 보통 저는 오픈 컬럼 방식으로 단백질 정제를 진행하는데 일루션이 끝나고 증류수로 3-4차례정도 컬럼을 다 채워서 씻어준 후에 20% 에탄올(+0.1%NaN3) 용액을 넣고 냉장 보관합니다. 이 컬럼으로 같은 단백질을 3번정도 정제에 더 사용을 하고 레진을 모두 모아 regeneration하는데, 레진 재생 프로토콜이 제각기 달라서 어떻게 하면 깨끗하고 복잡한 방법 없이 resin을 씻을 수 있을까 하는 궁금증이 있습니다.

Native 뿐만이 아니라 urea나 Gu-Hcl이 포함된 denaturing condition으로도 정제를 진행하기 때문에 서로 cross-contamination이 안되게 하고 싶습니다. 보통의 프로토콜은 그냥 EDTA로 씻어내고, 니켈이온으로 recharging하면 된다고 나와있는데 다른 것은 Gu-Hcl, SDS, NaOH, EtOH 등등을 사용하더라구요. 각각의 프로토콜을 참조해서 덜 복잡하게 SDS, NaOH, EDTA로 씻어내고 니켈 이온을 붙여주려고 하는데 이렇게만 씻어줘도 레진에 붙어있는 침전되거나 뭉쳐있는 단백질, urea, Gu-Hcl 등등이 다 없어질지 궁금합니다.

그리고 두번째는 단백질 정제시 denaturing condition에 사용하는 버퍼에 관련된 질문입니다. 제가 실험실에서 봤었던 두개의 매뉴얼은 모두 denaturing condtion에서 wash, elution을 할 때 pH 농도 차이를 이용하는 것이었는데, 레진 재생 프로토콜을 찾아보려고 매뉴얼을 이것저것 찾아보니 denaturing condition에서도 pH와 urea농도를 고정시켜놓고 imidazole 농도 차이로 wash, elution을 하는 것도 있더라구요. Denaturing 조건으로 단백질 정제를 많이 해보신 분들 중에서  pH 농도 변화와 imidazole 농도 변화로 일루션을 할 때 어떤 것이 좀더 purity가 높고 효율적이었는지 알고 싶습니다.

마지막으로 inclusion body를 녹여 denaturing 조건으로 정제할 때 6M Gu-Hcl이나 8M urea로 녹이라고 되어있는데, 둘 중에서 아무거나 사용해도 관계가 없을까요? Gu-Hcl 가격이 비싸고, 엄청 덩어리로 뭉쳐있는지라 버퍼 만드는게 힘듭니다 ㅠㅠ. 그럼 고수님들의 답변 부탁드립니다!
다들 수고하세요~

#Resin
답변하기
첫 댓글을 달아주세요.첫 답변을 달아주세요.
답변하기
할인행사 광고 검색광고
바이오닉스 바이오닉스
2020년 바이오닉스는 TECAN의 공식 파트너로 런칭! (런칭 프로모션 진행중) (1.24까지)
케이비티 케이비티
[케이비티]Heating Block, Thermo Shaker, Shaking Incubator, Stirr.. (11.26까지)
코람바이오텍 코람바이오텍
[Proteintech] 2020 마지막 전품목 이벤트! (12.28까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
무료 샘플 DNA/RNA Purification / nanostring Array / Denovix Quan.. (11.5까지)
코람바이오텍 코람바이오텍
[Cell Signaling Technology] 3+1 할인 행사! (12.31까지)
뷰키코리아 뷰키코리아
신제품 출시 기념! 최신형 병렬 증발 농축기 구매 시 정품 칠러 무상증정 이벤트! (12.31까지)
하나과학 하나과학
Socorex 2020 BIG SALE event - Socorex Acura manual micropipe.. (1.31까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
[에펜도르프코리아] Eppendorf 2020 하반기 프로모션 행사 : 실험실 필수품 피펫,원심분리기,PCR.. (12.31까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
sale
2/6  좌우
230,000
136,000129,200
555,000
143,800136,700
246,60074,000
379,000
47,20044,900
242,40072,800
50,00015,000
793,400753,800
887,200266,200
80,40024,200
22,7006,900
245,20073,600
238,70071,700
136,000
739,000702,100
309,000
388,500116,600
158,40047,600
924,000
79,50075,600
201,30060,400
139,000132,100
최근등록   더보기 >
OD600에서 측정한 E.coli CFU값 계산 어떻게 하나요..?   10.28
아가로스 젤이 쪼개졌어요...   10.28
논문공부중인데 complementation에 대해서 이해가 안가는 것이 있습니다   10.28
SDS-PAGE 시 sample이 제대로 loading 되지 않는 것 같습니다   10.28
in fusion 에 대해서   10.28
Transwell을 이용한 co-culture를 하는데 있어 문제가 생겼습니다.   10.28
THP-1 stock 나눔해주실분 계신가요..?   10.28
황색포도상구균 관련하여 질문드립니다.   10.28
효소실험 시 결과 %값이 100이 넘는 것은 어떤 의미인가요??   10.28
요새 cell이 자꾸 죽습니다... 오염인걸까요?   10.28
(주)비아이코퍼레이션
실험관련연재
박은총 연재중후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
Mr.S 연재중의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재중실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
이제욱 연재중생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아 광고