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lentivirus
(비회원)
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17.11.17 14:48
셀에 약물같은걸 추가 후 시간 별로 변화를 보시는 건가요?
그런거라면 지금 선생님은
약물을 동시에 넣고 1시간뒤 3시간뒤 5시간뒤 매번 extraction하겠다는 플랜이신데
저라면 비교적 간단한 약물 투여시간을 나누고
번거러운 extraction을 동시에 하겠습니다.
extraction 시각을 정해두고
5시간짜리는 5시간전에
3시간짜리는 3시간전에
1시간짜리는 1시간전에...
이 방법으로 의미있는 결과가 나오면, 재현성도 볼 겸 선생님 방법으로도 시도 해보겠습니다.
centrifuge 14,000g으로 돌리는데 BCA assay에서도 잘나오고 웨스턴에서도 잘나오더라구요
Sup만 뺄 때 침전도 같이 나오는거같으면 전량 다 빼지 마시고 100ul있으면 90ul정도 챙기세요.
centrifuge 속도가 높다고 단백질이 degradation되지는 않습니다. 안심하시고 max rpm에서 돌려도 상관없습니다.
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레벨3
cell40
(과기인)
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17.11.17 23:23
lentivirus님, 답변 감사드립니다.
저도 선생님 말씀처럼 스케줄을 조절해 볼려고 했는데
약물 처리 전 전처치를 또 시간대별로 복잡하게 정해주셔서 조절이 쉽지 않더라고요.
게다가 한번에 protein extraction 해야 하는 dish가 8개입니다 ㅠㅠ
아직 western blot을 시작한지 한달여 밖에 되지 않은 저로서는
속도도 빠르지 않고 해서 그냥 시간대별로 뽑는 게 맘편하겠다 싶어서
이렇게 질문을 남겼었습니다 ㅠㅠ
만약 1-2시간 정도 보관할거면 제가 위에 쓴대로 cell scraping 한 상태로 (centrifuge 직전)
4'C 보관해도 된다는 말씀이시지요? 1-2시간 후 cell이 다 모아지면 한번에 centrifuge 하고요.
감사합니다.
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레벨3
cell40
(과기인)
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17.11.17 23:24
Lucid님, 답변 정말 감사드립니다. 즐거운 주말 되십시오!