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질문 silver staining이 잘 안되요...ㅠ.ㅠ
알후이잉  | 2008.06.23 18:00
첨부파일 파일첨부: DSCN0626-1.jpg (90 KB)
이미지 첨부파일
silver staining을 하는 중인데요...

계속 줄이 보이는데요...

줄이 생기는 것을 보면 특정 레더 (양 많은 곳) 와 동일 선상에

젤 전체적으로 줄이 가 있습니다...

매번 젤을 걸어서 staining 할 때 마다 이런 결과가 나오는데...

이건 제가 무엇을 잘못해서 이런건가요??

저는 나름대로 옆 웰로 안 세도록 주의하고...

silver staining 할때에는 버퍼도 새것으로 갈아서 하고 그러는데...

도대체 무엇이 문제길래 이런 식으로 나오는 것일까요???

누가 답변좀 부탁 드립니다...ㅠ.ㅠ

(그림 참조하시면 래더 진한 부분과 동일 선상에 젤 전체적으로 선이 그어지는 현상을 보실 수 있으실 것입니다..)

제가 완전 실험을 잘못하고 있는건가요??

저 이거 결과 잘 나와야지 졸업 하는데...ㅠ.ㅠ

누가 좀 도와주세요...

#silver staining
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리Kozmoj  |  2008.06.24   
실버 스태이닝은 그자디 어려운 염색법이 아닙니다.
조금만 신경 쓰시면 좋을 결과를 얻으실 수 있을 것 같네요.

일단, 샘플의 정제도가 너무 낮은 것 같네요.
그리고, 젤과 젤판 사이가 완전히 밀착되지 않았을 수도 있을 것 같구요.

실험에 사용한 염색 프로토콜을 알려 주실 수 있나요?

한 번 확인해 보겠습니다.

알후이잉  |  2008.06.24   
e-mail 주소가 없다고 나오네요...ㅠ.ㅠ

간단히 답변 하자면...

silver staining은 bio-rad 킷을 사용하였구요....

bio-rad mini를 사용하여 page 하였습니다

젤판사이의 유격 때문이라면 딴 놈은 이런 현상이 없었는데

왜 유독 저에게만 나타나는것일까요??

ㅠ.ㅠ 죽겠네요...
꽃개구리Kozmoj  |  2008.06.24   
죄송합니다. 주소가 틀렸네요. 수정했습니다.

그림을 다시 보니, stacking gel 과 resolving gel 을 아직 분리하지 않은 상태네요.
그림을 잘 보면,
stacking gel 과 resolving gel 사이로 추정되는 부분에도 진하게 수평선이 가있죠?

resolving gel 을 만들고 stacking gel 을 올릴 때,
사이가 조금 뜬게 아닌가 싶은데...
resolving gel 만들 때 gel 의에 부어서 gel 굳히는 isoprophanol 이나 ethanol 등이 완전히 제거 되지 않은 것은 아닐까요?

다른 얘기지만,
염색 방법도 조금 수정되어야 할 것 같습니다.

샘플이 무엇인지는 모르겠지만,
gel 의 윗 부분이 굉장히 검게 염색이 되었네요.
꽃개구리Baltimore  |  2008.06.24   
실버 스테이닝은 아주 적은 단백질도 염색이 잘되는 편인데

음..

저정도면 단백질 발현이 거의 안되었다고 볼수 있으며 lysate양도 매우 적어 보입니다

그런데 너무 태우셧네요

잘 안나오니까 좀더 두고 보시려고 그러신듯하긴 합니다만

민아  |  2008.06.27    
저도 우선은 protocol요청합니다.(dydwnsk@naver.com)

develope time은 얼마정도 하신건가요?
그리고 젤은 직접 만드신건가요?

그리고 다른 잘나오는 sample을 가지고 coomassie로 염색해보시고 같은 현상이 나타나신다면 이건 silver문제가 아닙니다.

그리고 전체적으로 불규칙하게 탄것을 보니까 solution의 volume이 젤전체에 고루 퍼지도록 되는지 궁금합니다.

저는 1de 2de silver로만 하고 있어서 도와드릴 수 있으니까 메일 주세요.
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