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lentivirus
(비회원)
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17.09.20 19:23
우선 생각하고 계신 대부분이 맞습니다.
1.
Letivirus는 host cell genome에 Lentiviral vector상 5`LTR 3`LTR사이의 Sequence만을 삽입합니다.
genome에 들어가므로 stable cell line이 되는 거죠.
가장 먼저 할 일은 Virus를 만드는 것 입니다.
HEK293T와 같은 cell line에 Lentiviral vector, envelope vector, packaging vector를 한꺼번에 Transfection시키면 cell 로부터 virus가 만들어집니다. 그걸 collection해서 쓰는 것이지요.
Lentiviral vector, envelope vector, packaging vector는 각각 바이러스를 구성하는 부품들을 내재하고 있는 plasmid들이라고 생각하시면 됩니다. 세 개중 하나라도 없으면 바이러스가 만들어지지 않습니다.
세 개로 나뉘어둔 이유는 다른 이유도 있지만 안전성을 위해서라고 보시면 됩니다.
Lentiviral vector만 Transfection시키면 그냥 평범한 Expression vector를 넣은 셈 입니다.
대부분의 Expression plasmid들은 mammal cell에서 길어야 4일정도의 일시적인 발현, transient expression이죠. 간혹 genome으로 들어가 stable로 되긴 합니다만 매우 낮은 확률입니다.
그렇기 때문에 많은 사람들이 Stable cell line 손쉽게 얻기위해 Retrovirus와 lentivirus를 사용합니다
2.
네 Lipofectamine이나 fugene같은 걸로 넣으시면 됩니다.
3.
1.에서 충분히 답변이 된 것 같습니다. Stable cell line을 만들고 싶으시다면 lentivirus를 추천합니다
시설상 Virus사용이 힘드시면 Transposon vector를 이용해서도 Stable cell line 쉽게 만들 수 있습니다. Piggybac이라는 vector 검색해보세요. 효율은 lentivirus보다 떨어지긴 합니다.
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레벨3
cell40
(과기인)
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17.09.21 12:07
lentivirus님, 답변 너무나 감사드립니다. 정말 큰 도움 되었습니다.
글 적어주신 것 보고 좀 더 검색해보니 어려운 부분도 있지만 재미있기도 합니다.
다시 한번 감사드립니다. 행복한 하루 되십시오.