실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
beta-actin이 2밴드가 떠요 ㅠㅠ
레벨2 메밀 (대학원생)
cell을 trypsin으로 때서 모은 후, NP-40 buffer (+PI)로 lysis를 하고 bradford를 정량하는데
gel을 150볼트로 내린 후, 5% Skim milk로 상온에서 1시간 블라킹하고
1:5000으로 1차 액틴 4도씨에서 O/N
1:5000 2차 rabbit으로 RT에서 1시간
으로 분석을 했는데
계속해서 뒤에 흐릿한 밴드가 뜨거나 밑에 밴드가 뜹니다 ㅠㅠ
혹시나 lysis 단계에서 cleaved 된건지 gel을 너무 빨리내려서 그런지 안티바디문제인지
정확하게 어떤 문제인지 몰라 글을 올립니다.
저번 한번은 10번 쯤 쓴 안티바디로 혹시나 안티바디 문제일까 하여 stripping을 해서 새로운 안티바디로 붙히면 다시 이쁘게 뜨는 경우도 있었지만
이번에는 3번 밖에 쓰지 않은 fresh한 상태라 왜 저런 밴드들이 뜨는지 모르겠습니다.
액티 말고 다른 target 단백질들은 one 밴드로 이쁘게 뜨는데 액틴이 저런 경우는 왜그럴까요?
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