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recombinant baculovirus seed를 만들었는데요그걸로 Sf9, Hi5 cell에 infection시켜서 역가 측정하니깐 Sf9에서 역가가 훨씬 낫더라구요그래서 (10MOI) 10^8 FFU/ml로 계속 유지하고싶은데.. 1x10^8FFU가지고 0.5, 5MOI로 infection 하였는데 5MOI가 1x10^7FFU/ml로 나와서...요...1. high titer 유지하는 방법과 moi가 높을수록 높은 titer를 갖나요?
>moi가 titer를 의미하니까 moi가 높을수록 titer가 높겠죠.
2. 그럼제가 10moi, 15moi로 infection하면 virus titer가 계속적으로 높을 수 있을까요?>저는 titer를 높이기 위해 viral passage를 3회 정도 넘기면서 volume도 높여서 실험하였습니다.
3. titer값 측정을 qPCR kit를 측정하는데 kit가격이 너무 후덜덜하네요ㅜㅜ titer 측정할 수 있는 방법이 있는지 알려주세요.. (또다른 방법은 plaque assay가 있다는걸 알지만 이거말고 다른 방법을 추천해주세요!)
>저는 EPDA/end point dilution assay로 대략적인 titer를 확인하고 이후에 BIIC stock을 만들었습니다. 어차피 단백질만 정제하면 되니까 정확한 moi를 계산하는 과정은 불필요하다고 생각합니다.
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레벨1
bbc
(대학생)
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17.09.20 10:02
답변 너무 감사드립니다.
답변이 너무 안달려서 망연자실로 포기하고있었는데 너무 늦게 확인했네요 ㅠㅠ
제가 질문에는 더 작성을 못했지만 궁금한점들이 있어서 혹시 이 답변을 보신다면
miuak@naver.com으로 연락주실 수 있을까요? ㅠㅠㅠ
baculovirus에 이론으로만 접하고 처음으로 실험하는건데.. 아는분이 없어 혼자 해결하고 있거든요ㅠㅠ