사진에서 보이는건 cell이 아니라 membrane의 pore입니다.cell은 3시방향에 한개 정도 보이네요.
시간을 너무 짧게 둔 경우 cell이 pore를 완전히 빠져나가지 못하고 박혀있는 경우도 있긴 한데
이 사진으로는 구분하기 어렵네요.
washing을 좀더 하시면 구분이 될 거예요. 아니면 invasion되는 시간을 늘려보시든가요.
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레벨3
fluhyun
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17.08.25 15:50
윗분 말씀처럼 wash를 좀더 잘하시면 좀더 보일것 같습니다.
둥근 모양은 pore 이고요, cell 은 보통 키우실때 현미경으로 보이는것처럼
거의 동일한 모양으로 membrane 에 붙어서 잘 보입니다.
참고로 제 data 를 첨부하여 드립니다.
invasion 조건만 잘 맞는다면, pore 와 cell 은 구분이 어렵지 않습니다.
pore size 8um 에 muscle 이라 사이즈가 길고 커서 명확하게 보이고,
자극이 있고 없고에 따라 cell 의 이동이 차이도 보기 어렵지 않았습니다.
조건 잘 잡으시면 좋은 data 얻으시기 어렵지 않으실 거에요.
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레벨1
llllllll
(대학원생)
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17.08.28 09:15
도움주셔서 감사합니다~
저 질문이 하나 더 있는데요!
현미경으로 찍을때, insert의 아래쪽을 찍어야 하는게 맞지요? 근데 초첨이 잘 안맞춰지더라구요.
그래서 혼자서 하다가 내가 잘하고 있는건가.. 왜 초첨이 잘 안맞춰지지 라고 생각했거든요.
그 insert가 너무 작아서 재물대 위에 못올리기 때문에, 24well 뚜껑위에 올려놓고 관찰하거든요.
이게 괜찮은 방법일까요? 다들 어떻게 관찰하시는지 궁금합니다.
그리고 워싱은 24well에 dw를 넣고 거기서 살살 흔들흔들 하면서 dw를 여러번 교체하면서 해주면 되겠지요?
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레벨3
fluhyun
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17.08.28 15:57
저도 wash 나 염색은 24 well 에 transwell 을 넣어서 했습니다.
wash 할때 그냥 DW 에 여러번 하였고, 전 따로 흔들어주거나 이러지는 않아도 깨끗하게
wash는 되었습니다.
마지막 단계에서 현미경 사진은..
membrane 을 칼로 도려내어 슬라이드 글라스에 mounting sol 을 놓은 후 덮어주었어요.
cell 이 있는 부분이 바닥에 붙도록 하여서요.
그위에 커버글라스를 덮어서 기포가 생기지 않도록 눌러준후 가장자리는 매니큐어로 고정시킨 후
사진을 찍었습니다.
저 같은 경우는 cell 을 counting 하기만 하고 따로 흡광도 측정을 하지 않아서
깔끔한 사진을 얻기 위해 이렇게 했습니다.
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레벨1
llllllll
(대학원생)
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17.08.31 11:42
저 한가지 질문이 더 있어요
마지막 현미경으로 측정시 membrane을 칼로 도려냈다고 하셨는데,
손톱보다 작은데 어떻게 칼로 도려낼 수 있나요? ㅠ
시도하다가 membrane이 손상될까봐 걱정이예요ㅜㅜ
현미경 관찰전에 staning을 하잖아요. manufacture protocol에서는 20분 하라고 했는데
주로 몇분정도 하시나요?
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레벨3
fluhyun
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17.09.29 16:38
뒤늦은 답변입니다.
일반 커터칼 끝으로 도려내어도 전혀 찢어지지 않고 깔끔하게
잘 도려내집니다..
현미경 관찰전에 염색?
정확히 무엇을 말씀하시는지..
전 Hematoxylin 5분 eosin 1-2분 염색하였습니다.