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질문 Paper disc법을 이용하여 추출물의 항균활성 측정하는 법좀 알려주세요
알이석사(대학원생)  | 2017.08.07 17:17
 안녕하세요
저는 하수슬러지의 미생물을 한약재 부산물의 추출액이 억제하거나 항균하는지 실험을하려고합니다.

1. Paper disc 법을 이용한 항균활성시험을 진행해도 될까요?

2. 먼저 하수슬러지를 LB배지를 이용하여 도말 배양하려고 합니다 그리고 Paper disc 를 이용하여 한약재 부산물의 추출액을 loading시키려고 합니다 맞는 방법인가요?

3. 그렇다면 한약재 부산물을 추출할때 에탄올, 메탄올, 물 추출방법이있는데 어떤것을 사용하는게 좋으며, 에탄올과 메탄올을 사용한다면 그 비율이 어떠해야 할까요? 문헌상에서는 95%의 에탄올 추출을 사용하였습니다.

4. 72시간 교반 추출해서 나온 추출액을 3000rpm으로 3시간, 그 후 상등액을 바로 loading시켜도 될까요?..

도와주세요.. 미생물은 처음입니다..

#식물추출
 
#Paper disc
 
#항균활성
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리세라프  |  2017.08.08   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
1. Disc Diffusion method 는 항균활성시험의 기본입니다. 사용하시면 됩니다.

2. 물론 이는 미생물이 plate 에서 loan 을 생성할 수 있다는 가정하에 clear zone 을 측정하는 방법입니다. 즉 하수 슬러지를 도말하여 incubation 한뒤 loan 이 생성되지 않는다면 어렵겠지요.. 먼저 하수슬러지를 도말먼저 해보시고 incubation 해보세요.

3. plant 에는 정말 많은 chemical 들이 포함되어있습니다. 즉 extract 의 경우 어떠한 방법으로 추출하느냐에 따라 달라집니다. 원래 plant extract 의 경우 여러가지 방법으로 모두 extraction 한 뒤에 모두 테스트 해보시는게 좋을듯 합니다. 

꽃개구리유용규  |  2017.08.08   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

활성이 약할 경우도 있어서 plate에 직접 dotting해서 clear zone을 직접 확인하기도 합니다. disk에 가려져서 clear zone이 보이지 않기 때문이죠

하수슬러지를 이용하신다면 접종 농도를 어떻게 맞추실지가 관건일것 같습니다. 실험할 때마다 그 균의 접종농도를 일정하게 맞추기가 어려울 것 같습니다. 그 농도를 조절할 방법을 찾는 것이 중요할 것 같습니다. 그리고 하수 슬러지 내의 미생물은 그 하수의 특성에 따라... 그리고 계절별로 그 성상과 비율이 계속 달라집니다.

표준주를 이용해서 1차 실험을 해보시는 것은 어떨까요
ATCC25922, ATCC25923  (대장균과 포도상구균) 이것들로 먼저 그람 양성균과 음성균에대한 항균활성을 먼저 확인하시고 그 다음에 슬러지로 가셔도 괜찮을 것 같습니다.

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