일단 NHS/EDC가 어떻게 돌아가는지 원리는 알 것 같습니다. 그런데 제가 실험하고자 하는 대상이 Amino-modified oligonucleotide(C6, 5')인데... 프로토콜은 죄다 단백질 관련이네요... (아직 어디다가 conjugation하는지 제대로 나오지는 않았는데, 단백질에 붙이는 건 아닙니다. 아마 polymer에 부착할 듯 합니다) 그래서 몇가지 여쭙고자 합니다.
1. amine기가 붙은 oligonucleotide를 conjugation할 때는 pH를 8.5~9.5 사이로 유지한다는데, NHS/EDC 반응을 진행할 때도 마찬가지인가요? pH를 이렇게 유지하는 이유가 free aliphatic amine이 pH 8이하가 되면 농다가 낮아지기 떄문이라고 합니다.
2. oligonucleotide의 backbone에 있는 phosphate가 반응에 영향을 주지는 않는지요?
3. activation은 EDC/NHS를 처리하기 전에 따로 진행해주는 건가요? 아니면 NHS/EDC를 넣으면서 activation이 되는 건가요?
4. pH를 8.5~9.5 사이로 유지한다는 것 외에 다른 주의사항이 있나요? (예 : 처리 후 시료는 반드시 냉장보관을 해야 한다)