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질문 buffer 제작 질문
알marinebio_pc(대학생)  | 2017.06.30 23:59
얼마 전에 질문 올렸는데 원하는 답변이 아니라 다시 질문 올립니다ㅠㅠ

  레시피가 이렇게 나와있습니다. [CTAB extraction buffer   :  3% Cethyl trimethyl ammonium bromide, 1.4 M NaCl, 0.2% β-mercaptoethanol, 20 mM EDTA, 100 mM Tris, pH8.] 여기서 (1) 3% 세틸트리메틸암모늄브로마이드 라는 말이 버퍼용액을 100ml 제작한다고 한다면 여기서 3%농도로 세틸~브로마이드를 넣고, 1.4 M NaCl은 100ml에서 1.4 M이 되게끔 즉, 58.5g/mol (NaCl mass) * 1.4mol/L * 0.1 L = 8.19g의 NaCl이 100ml에 녹아있게끔 제작하라는 뜻인가요? 그리고 (2) 레시피 마지막에 pH8은 Tris를 100mM 농도로 넣으면 pH가 8로 맞춰진다는 건가요? 아니면 따로 pH를 조절해주는 무언가를 첨가해야하나요? 마지막으로 (3) Tris 종류가 여러가지 있는 것으로 압니다. 저희 실험실엔 Tris(Base)라고 적혀있는데 이걸 사용하면 되는건가요?  버퍼제작이 처음인 학부생이라 이런 허접한 질문 올려서 죄송합니다... ㅠ
#buffer제작
 
#CTAB
 
#버퍼 제작
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
buffer  |  2017.07.01    
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
어지간한 Buffer들은 구글링하면 바로 나옵니다.
불안하면 2~3 사이트 정도 비교해서 만드세요.

http://cshprotocols.cshlp.org/content/2009/10/pdb.rec11984.full?text_only=true

Tris-HCl buffer들은 Tris를 물(MilliQ같은)에 녹인 뒤 6N HCl, 1N HCl로 pH조절 해주시면 됩니다.
Tris-HCl역시 자세한 제조법은 역시 구글링하면 나옵니다.


꽃개구리유용규  |  2017.07.03   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
 각각 최종농도라고 생각하시고 넣으시고요.... 만약 만들고자 할 부피가 1리터 라면 pH를 조정하기 전에 900ml정도가 되게 만드시는게 좋습니다. Tris (base) 사용하시면 되고요....

순차적으로 녹여나가시면 될 것 같습니다. w/v으로 3% 가 되게 CTAB 녹이시고, 1.4M 이 되도록 NaCl 녹이시고요.... mercaptoethanol은 v/v로 0.2% 되게 넣으시는데..이건 냄새가 지독하고요.... 후드에서 하시거나 환기 잘되는 곳이 좋겠네요.... 다른 것들도 그런 식으로 하시면 될 듯 한데요.... EDTA였다.... 뭐였더라....pH에 따라서 용해도가 달라지는 애가 있었는데... 그건 기억이 안나네요... 순차적으로 넣으시면 되고요...  NaCl 계산하시듯이 하시면 되요

pH는 저도 기억이 안나네요.... 해보시면 바로 답 나올거 같아요 ^^;;; 다 넣어 녹이고 pH를 측정하셔서 마무리조정하고 volume 맞추시면 될 것 같습니다.
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