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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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질문 Isoelectric focusing(IEF) 관련해서 기초적인 질문드립니다.
개구리순똘(대학원생)  |  2017.05.15 23:06

IEF 해본적이 없고, 셋팅을 해보고자 합니다.

pre-cast gel을 사용할까 생각 중이기도 하지만,

만들어서 쓸 수 있으면 만들어서 써보려고, 공부중입니다.


IEF에서 중요한 것은 pH gradient를 어떻게 유도하느냐 인데,

Arginine : pI 10.76
Lysine : pI 9.74
Anserine : pI 8.27
Histidine : pI 7.47
Histidyl-glycine : pI 6.81
Isoglutamine : pI 5.85 등의 ampholyte를 mixture 형태로 사용하여 pH gradient를 만들 수 있다고 확인하였습니다.


이때,

1. 일반적으로 pH3-7, pH3-10 range가 되도록 많이 사용하던데, 조성을 적절히 변경하여 제 맘대로 pH range를 조절해도 실험은 잘 될까요?? 아니면 pH3-7, 3-10에 비해, resolution이 안좋아 지는 등의 안좋은 점이 생길까요?

2. pH gradient가 생기는 순간은 gel이 만들어지면서 부터인가요, 아니면 전류가 흐르는 조건에 들어간 후부터인가요? (ampholyte mixture를 넣어서 gel을 만들던데, 딱히 pH gradient가 생기는 step은 없는 것 같습니다. gel이 만들어진 순간에는 모든 ampholyte가 고르게 분포하고 있다가, 전기가 흐르게 되면서 pH gradient가 형성되는 것 같은데, 자세히 공부를 하기 전에는 gel이 만들어지는 순간 이미 pH gradient가 형성되어 있을 것으로 생각하고 있었습니다.)

3. Tris-glycine gel과는 달리, FMN이라는 것을 사용하여, 빛을 이용해 gel을 굳히는 방법을 사용하던데, Tris-glycine gel처럼 그냥 ammonium-persulfate와 TEMED로 굳히면 안되거나 안좋은 점이 있나요???


IEF 초보자를 위해 고수님들의 친절한 답변 부탁드립니다.

#IEF
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