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레벨5
유전학도^^v
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17.04.11 11:10
차라리 antibody band가 안 뜨는 게 낫습니다.
저도 왜 어떤 때에는 antibody가 떨어져 나오고, 어떤 때에는 붙어 있는지 모르겠지만,
아마도 bead와 특정 antibody 사이의 결합력이, 실험조건에 따라 영향을 받는 것 같습니다.
가장 큰 부분이 elution 때가 아닐까 싶습니다.
제 경험상으로는 상업적으로 판매하는 HA나 Myc antibody는 antibody band가 보편적인 실험조건에서는 거의 나오지 않았습니다.
그리고 양이 적어 안 보이는 것일 수도 있으니, 궁금하시면 해당 antibody를 detection할 수 있는 다른 antibody로 동일 샘플에 대한 western을 해 보시길 바랍니다.
참고하세요.
위 그림이 맞나요?? (feat iPAD & pencil)
total lysate를 우선적으로 확인하여 protein 여부를 확인 하셨는지요??
1. A specific antibody를 쓰고나서 결과를 보는데 A protein이 없고 B protein이 뜰수는 없습니다.
실험 설계나 antibody를 다시 확인해 보시기 바랍니다.
2. A protein이 들어있는데 나오지 않았다면 단순히 Antibody 문제라고 볼 수 있습니다.
3. A protein 자체 degradation 문제도 가늠해볼 수 있습니다.
1) Phosphatase inhibitor 잘 쓰셨는지 확인해 보시고.
2) On ICE 여부도 잘 고려해보시고..
4. 반복적 문제가 발생하면 오리털파카 입고 콜드룸 들어가서 실험하는 경우도 종종 있으니,
정 원인을 못찾으신다면 이것도 하나의 궁여지책이 될 수 있겠습니다. ㅠ