위에 강시 선배님께서 말씀 하셨다 싶이...

Plasmid에 한개의 Restriction enzyme을 처리한 뒤, 반응을 시키고,

2차 Restriction enzyme을 처리를 하시면 되요.

하지만 여기서 중요한 것은 두 enzyme이 어느 site를 자르는지 잘 확인하시고,

어떤 Restriction Enzyme을 먼저 쓰실지 정하셔야 합니다.

왜냐하면 질문자께서도 잘 아시겠지만.... Restriction Enzyme마다 자르는 site가 틀리기 때문입니다.