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질문 세균이 만드는 단백질 추출
알판다는 뒹굴뒹굴(중고생)  |  2017.03.29 20:53
 학교에서 Pseudomonas syringae 를 사용해서 실험을 진행하려 하는데 이 세균이 만드는 특정 단백질을 추출하고 싶어요.
필요한 기기나 방법이 있다면 알려주세요. ㅜㅅㅜ
프라이머를 디자인 해야 하나요..?
#Pseudomonas syringae
 
#단백질 추출
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리Kozmoj  |  2017.03.30   
먼저 말씀하신 미생물을 배양해야 합니다.
그러기 위해서는 배양을 위한 도구와 재료가 필요합니다.
특정 미생물을 키우기 위해서는 그 미생물이 잘 자랄 수 있는 배지와 배양 조건을 맞추어 줘야 하니
키우고자 하는 미생물의 배양에 대한 방법을 찾아 보세요.

미생물을 잘 키워 세포를 많이 얻을 수 있다면, 이제는 그 세포를 깨야 합니다.
그러기 위해서는 세포를 깰 수있는 도구가 필요합니다. 미생물 세포 파쇄 등의 방법에 대해 찾아 보세요.

미생물을 깨고 나면 그 다음은 원하는 단백질을 정제해야 하는데, 원하는 단백질이 세포의 어느 부분에 있을지에 따라 사용할 재료가 달라집니다.
세포질에 존재한다면 미생물 파쇄액으로 실험을 진행하고, 세포막 등에 존재한다면 파쇄하고 나온 찌꺼기로 실험을 진행해야 합니다. 어디에 존재할지는 문헌 조사를 통해 확인하던지, 단백질의 활성 확인을 통해 확인해야 합니다.

어느 부분으로 실험을 진행할지가 결정되었다면 이제는 단백질을 정제해야 하는데, 여기에도 많은 도구와 장비가 필요합니다. 단백질 정제에 관련된 방법을 찾아 보세요.

더 조사해 보고 궁금한 것이 있으면 조금 더 구체적으로 질문해 주세요.
좋은 성과가 있기를 바랍니다.
올챙이안암로터리  |  2017.03.30   

특정 단백질을 추출하고 싶다면, 가장 기본적인 affinity column을 이용하면 되겠네요. Pseudomonas syringae 세균을 배양하신 뒤, detergent 혹은 sonicator와 같은 장비로 membrane을 파쇄합니다. 이후 cell debris는 제거한 뒤, sup만 취하여  affinity column으로 정제하시면 됩니다. 이때 사용하는 기계는 주로 FPLC로 단백질을 정제할 때 사용합니다.

대왕개구리강시  |  2017.03.30   
특정 단백질의 회수가 목적이라면,
P. syringae의 genome sequence에서 그 단백질 유전자를 확인하시고 그 유전자를 증폭할 PCR primer를 디자인하세요.
물론, 발현에 사용할 대장균의 과발현 벡터도 선정을 해야 primer에 넣을 restriction site도 디자인할 수 있습니다.
PCR로 유전자를 증폭하고, 벡터에 클로닝하고, 대장균에 넣고, 발현조건을 잡아서 과발현시키고, 그리고 나서 컬럼으로 정제하면 됩니다.
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