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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
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질문 RT-PCR에서 프로토콜 내용중 질문이 있습니다.
알뚭뚭(대학생)  |  2017.03.21 15:56
 RNA를 loading하려고 denaturing agarose gel 사용하였는데요.
denature 과정중 60도씨에서 10min간 진행했는데 왜 60도에서 진행했는지 궁금합니다.
그리고 그 과정 바로 뒤에 ice 5min과정은 왜 해야하는지도 알 수 있을까요?

실험 결과 28S : 18S 결과값이 28S만 거의 진하게 나오고 18S는 거의 밴드가 나오지 않았습니다.
어떻게 해석 해야하는건가요??
#RNA
 
#PCR
 
#Denature
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2017.03.21   
DNA와는 달리 RNA는 고온에서 끓이면 조각조각 파괴됩니다.
그래서 60도시 정도에서 denaturation시킵니다.
끓인 샘플을 바로 loading하지 못하므로 잠깐 얼음에서 식히는데 RNA 샘플 buffer에는 formamide와 formaldehyde 등의 denaturant가 들어있어서 얼음에 잠깐 보관해도 denaturation된 상태를 유지합니다.

보통은 18S 가 많이 남고 28S가 많이 파괴되는 양상을 보입니다.
남은 밴드가 18S 가 아닌지 확인해 보세요. 
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