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도움되길
(비회원)
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17.02.27 11:14
저는 키트를 주로 사용해서 RNA 분리를 했었습니다.
잘 되지 않을 때는 우선, 분리하고자 하는것이 조직인지 세포인지부터 체크해야합니다.
그리고 조직볼륨에 따른 RLT 버퍼의 용량도 체크해야하고요.
또 프로토콜에도 있을텐데, 잘 깨지지않는 샘플일 경우 lysis 방법이 따로있습니다.
syringe로 깨주거나, sonication해주거나, 혹은 RNA분리 키트사용 전에 lysis를 해주는 키트도 있습니다.
제 생각에는 트리졸을 사용하고 키트랑 섞으면 안될것 같은데요..
그부분은 명확하게 답변을 드리기는 어렵네요^^;
lysis를 잘 해줄수있는 방법을 찾으시길 권해드립니다.
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370-326
(비회원)
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17.02.27 11:30
저도 RLT buffer로만 진행 하였을때 RNA가 깨끗히 분리되지 않아서
1차로 Trizol로 한다음 Dnase 처리한뒤 2차로 다시 키트로 뽑았더니
너무 깨끗하게 잘 나왔어요~^^
답변 달아주신 모든 분들 감사합니다~ ^^
우선 trizol 처리 후 보유중인 퀴아젠 키트로 분리 해보고 이상이 있으면
trizol 처리 전용 키트를 써봐야겠네요 ㅠㅠ
( 근데 lysis과정에서 sonication이나 기타 강한걸 사용시에 RNA가 깨지지 않을까 걱정이 되는데
그렇진 않을까요? )
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kyongshin
(비회원)
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17.03.02 17:35
안녕하세요 ZymoResearch 한국공식수입원 경신과학(주)입니다.
Trizol샘플 --> 일반 키트로 뽑는경우는 대체로 Binding 단계부터 Washing 단계까지 모두 칼럼 및 버퍼가 적합치 않기 때문에 제대로 prep되지 않으실 겁니다.
ZymoResearch의 Direct-Zol RNA kit 은 Trizol 샘플의 Column Binding Condition과 Phenol Washing을 제대로 수행 할 수 있도록 고안된 키트로 국대 유수 연구자들이 사용중인제품입니다.
본 제품 샘플 테스트 가능하오니 자사로 연락 주시기 바랍니다.
T)02-576-6303
감사합니다
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개구리알
(비회원)
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17.03.03 09:43
http://www.molbi.de/protocols/rna_prep_comb_trizol_v1_0.htm
생각보다 간단합니다
위의 프로토콜 참조.