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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
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질문 혹시 trizol과 키트를 동시에 써보신 분 계신가요?
알네이쳐킴  |  2017.02.27 11:01

 RLT 버퍼를 넣고 볼텍싱이든 뭐든 하던간에 잘 깨지지 않는것에서 RNA를 분리하려 하는데

trizol이 녹이는 효과 자체는 강력한거 같아서 trizol을 RLT버퍼 대신 써서 녹인 후

뒷 과정을 퀴아젠 키트로 진행하면 RNA분리 상에 문제가 있을까요?
#trizol
 
#RNA분리
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
도움되길  |  2017.02.27    
저는 키트를 주로 사용해서 RNA 분리를 했었습니다.
잘 되지 않을 때는 우선, 분리하고자 하는것이 조직인지 세포인지부터 체크해야합니다.
그리고 조직볼륨에 따른 RLT 버퍼의 용량도 체크해야하고요.
또 프로토콜에도 있을텐데, 잘 깨지지않는 샘플일 경우 lysis 방법이 따로있습니다.
syringe로 깨주거나, sonication해주거나, 혹은 RNA분리 키트사용 전에 lysis를 해주는 키트도 있습니다.
제 생각에는 트리졸을 사용하고 키트랑 섞으면 안될것 같은데요..
그부분은 명확하게 답변을 드리기는 어렵네요^^;
lysis를 잘 해줄수있는 방법을 찾으시길 권해드립니다.
370-326  |  2017.02.27    

저도 RLT buffer로만 진행 하였을때 RNA가 깨끗히 분리되지 않아서

1차로 Trizol로 한다음 Dnase 처리한뒤 2차로 다시 키트로 뽑았더니
너무 깨끗하게 잘 나왔어요~^^

지나가다  |  2017.02.27    

보통은 Trizol로 이용해서 total RNA를 뽑고 마지막에 RNase-free water에 녹인후, 이를 QIAGEN kit column을 이용해서 cleanup 하죠 (예전에 microarray 분석할 때 업체측에서 이런방식을 요구하기도 했었습니다.)

Trizol로 lysis후 바로 column에 로딩해서 total RNA 뽑는 방식의 kit 들이 있습니다.
http://www.geneall.com/goods_detail.php?goodsIdx=1680&Showno=0
http://www.zymoresearch.com/rna/rna-isolation/rna-from-trizol-tri-reagent

알네이쳐킴  |  2017.02.27   


 답변 달아주신 모든 분들 감사합니다~ ^^

우선 trizol 처리 후 보유중인 퀴아젠 키트로 분리 해보고 이상이 있으면

trizol 처리 전용 키트를 써봐야겠네요 ㅠㅠ


( 근데 lysis과정에서 sonication이나 기타 강한걸 사용시에 RNA가 깨지지 않을까 걱정이 되는데

그렇진 않을까요? )

kyongshin  |  2017.03.02    
 안녕하세요 ZymoResearch 한국공식수입원 경신과학(주)입니다.


Trizol샘플 --> 일반 키트로 뽑는경우는 대체로 Binding 단계부터 Washing 단계까지 모두 칼럼 및 버퍼가 적합치 않기 때문에 제대로 prep되지 않으실 겁니다.


ZymoResearch의 Direct-Zol RNA kit 은 Trizol 샘플의 Column Binding Condition과 Phenol Washing을 제대로 수행 할 수 있도록 고안된 키트로 국대 유수 연구자들이 사용중인제품입니다.


본 제품 샘플 테스트 가능하오니 자사로 연락 주시기 바랍니다.
T)02-576-6303

감사합니다
개구리알  |  2017.03.03    
 http://www.molbi.de/protocols/rna_prep_comb_trizol_v1_0.htm


생각보다 간단합니다

위의 프로토콜 참조.

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