실험 Q&A Immunology > Immunofluorescence
Fluorescence를 이용한 ligand-protein dissociation constant 구하는 방법 ?
Choi (비회원)
어떤 단백질과 리간드(ligand) 사이의 dissociaton constant(Kd)를 fluorescence를 이용하여 측정하고자 합니다. 예전에 단백질에 Trp(W)이 있을경우, 고정된 단백질 농도에 리간드 농도를 변화하면서 fluorescence를 측정하여 Kd를 측정한 적이 있습니다. (이런 실험을 Intrinsic fluorescence quenching 이라고 합니다..) 그런데 지금 단백질은 Trp가 없습니다. 그래서 fluorescent label된 리간드를 이용해서 실험하려고 하는데, 이럴경우, 리간드 농도는 고정하고, 단백질 농도를 변화하면서 fluorescence를 측정해야 하는건지요? 혹시 이런 실험법을 무엇이라 부르며, 이와 관련된 reference 있으면 좀 알려주세요... 참고로 Pyrene으로 label된 Acyl-CoA 가 제가 사용할 리간드입니다. (Exc=350nm, Emi=380nm)
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