실험 Q&A Cell Biology > Cell Culture
ELISA
레벨2 대학원생
human cell에서 세포표면 표지인자인ICAM VCAM을 보려고 합니다. 실험실에 있는 프로토콜만 보고 실험을 시작해야 하는데 막막하네요. 프로토콜은 다음과 같습니다. 1. 96well에 cell을 seeding 하고 각각을 약물처리 2. PBS 워싱 후 0.25% Glutaraldehyde solution으로 고정 3. PBS 워싱 후 1차 항체 4도씨 O/N 4. PBS 워싱 후 HRP-conjugated Ab로 2차 1hr. 5. Substrate reagent 처리 후 15~20min 6. 2N 황산용액으로 stop 7. Read at 450nm, 540nm 8. water로 워싱 9. Crystal violet dyeing solution 을 50ul첨가 30min 10. water로 워싱 11. 33% acetic acid 첨가 12. Read at 550nm, 650nm 20분동안 측정 이런데요. 제가 궁금한 것은 1. 도대체 여기서 쓴 substrate solution은 무엇이냐. 2. 그리고 만약 스탠다드를 잡는다면 어떻게 해야 하는지. 3. 그리고 substrate 처리한 후 crystal violet으로 염색하는 이유. 가 궁금합니다. 그리고 비슷한 방법으로 실험하시는 분들 프로토콜에 빠지거나 틀린 부분 있으면 지적해 주시면 감사하겠습니다 .^_^
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